关于脐带贴壁的问题

zengping120919

回复 忘虚 的帖子. a' X$ ?: @) K3 C

, m* X" d$ H2 V5 p才养的，四天就看到有细胞长出来了，今天第六天，已经长了一片了

zengping120919

这个和脐带本身也是有关系的，脐带胶质多的脐带更容易长出来，而且组织块不宜与空气接触时间太久，就要求处理脐带的时间要尽量快。

zengping120919

我们实验室培养感觉挺简单的，没有他们说的那么复杂，脐带从手术室拿出来是放在加了双抗的生理盐水里。处理脐带时，先将整根脐带用PBS溶液洗一遍，然后用75%酒精浸泡大概5分钟，主要是消毒，并且会让脐带表面的羊膜皱起，便于后续处理，在将整根脐带放在PBS溶液中，并将脐带剪成2-3cm的小段。另取一个无菌的玻璃平皿，用来分离脐带，主要是逐段去掉羊膜、动脉和静脉（注意动脉和静脉周围的组织一定要尽量保留，华通胶一定要保留，而且在分离脐带的过程中不能用溶液浸泡分离好的组织），待所有小段都处理好后，将组织剪碎成1mm3的小块，用少量含10%FBS的培养基接种。我们用的是10CM的培养皿，每个皿大概13-15mL培养基。将培养皿放入细胞培养箱中，前三天尽量不要动。如果发现培养基过少，可以适当补液，每个皿大概补2-3mL。除非脐带非常不好，一般一个星期就能长出来，好的话四五天，慢的话不会超过十天。不过我们在培养过程中发现，FBS 真的非常重要，并不是说只要是进口的就一定能长出来，有的批次就是不适合养间充质干细胞。如果你的细胞一段时间内都长不好的话，建议可以换个批次的FBS试试。还有期待尽量选新鲜点饱满的，胶质多的话就更好了。

zengping120919

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! @1 r9 [" ~, @) @. N0 D! D把所有的组织全部剪碎后直接接种的，要不不好贴壁的吧

zengping120919

回复 蜗牛爱贝贝 的帖子
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4 l1 s4 q$ e2 h6 ~( T% A- N' O这是在脐带非常好的情况下，一般情况下要一周的，而且刚爬出来的细胞只有一点点，如果不仔细找的话，可能看不到