分离的脂肪MSC增殖很慢怎么办?

zhen022

最近分离脂肪MSC，方法是获取大鼠腹股沟白色脂肪组织，然后剪碎用胶原酶消化1h。离心后去细胞后培养，用的是hyclone的a-MEM+10%FBS血清+双抗培养。细胞在开始有一些咋细胞，传代一次还可以，杂细胞较少。就是再次传代时候会遇到增殖相对较慢，大家培养的时候是加了生长因子么？还是血清不对？

firstaider

建议加入bFGF，浓度10ng/ml

zxd962735279

回复 jddakui 的帖子
2 a9 B' O! e; e1 W; d7 r. k2 m+ r. k
代次越高出现脂肪滴的可能就越高，低代次的一般不会有

jddakui

回复 zxd962735279 的帖子
6 g7 U( ?( E3 ^  T2 Y: k* e. Y2 y& _) O" Y8 n
我换液了，脂滴增多是正常现象吗？胰酶处理我还要在考虑一下，谢谢你的提议

zxd962735279

回复 jddakui 的帖子
' n- v7 B9 C% Z8 x1 l5 r5 H: e2 I9 K3 u
* {- x) q0 |6 j0 q1 _& ~$ H按时机不好计算，就是不要把细胞消化下来就行

jddakui

回复 zxd962735279 的帖子
! j1 c0 g" S, c2 |  X5 v/ Y8 n
; k0 _9 v9 i" S+ e我能理解为 ： 现在用胰酶处理1min然后培养基终止  继续培养吗？标记P1?

zxd962735279

回复 jddakui 的帖子$ H! ~3 n3 ?% e* b1 B

& T. a7 L0 n4 a6 _& ]( [时间太长啦，可以让细胞过一下胰酶，但是不要把它消化下来，等他收缩就添加培养基培养就行

jddakui

回复 zxd962735279 的帖子( b5 ~1 M" M# F2 m: R( X

& A  ?, E& }$ t: Q' ?我现在还是p0 这都17天了 初始密度比较低 什么时候传代会比较好 ？有些细胞都变形了 会不会分化了？

zsykdx

要加EGF的

沙漠狐o0

建议更换培养基，可以选择一些间充质干细胞无血清培养基。3 q6 I8 I% E0 m# O3 Q. X
或者在基础培养基中添加一些因子。