分离的脂肪MSC增殖很慢怎么办?

zhen022

最近分离脂肪MSC，方法是获取大鼠腹股沟白色脂肪组织，然后剪碎用胶原酶消化1h。离心后去细胞后培养，用的是hyclone的a-MEM+10%FBS血清+双抗培养。细胞在开始有一些咋细胞，传代一次还可以，杂细胞较少。就是再次传代时候会遇到增殖相对较慢，大家培养的时候是加了生长因子么？还是血清不对？

bianpy

你多久第一次传代？一般密度低的话就长的慢

woshibotao_01

你原代和传代后用的血清是同一个批号么？% ]$ ?$ G; ?* Q# y3 m* _
因子可以加的，利于细胞增殖。不加因子，细胞长的可能不快。

zxd962735279

回复 zhen022 的帖子0 X8 _. W7 a6 L0 T( w; G

- y+ s: g' r& h% @& n5 b0 g4 R3 I: z7 x脂肪间充质细胞的生长速度一般在第一次传代的时候就基本确定了，与大鼠本身的状态有很大关系，如果原代传一次后长的慢就重新做吧--建议哦，如果不想扔就把血清浓度稍微加大一点试一试

zhen022

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- v6 J5 l* Y  z, g) ^貌似七天左右，不过第一次长的基本八九十的覆盖率了。还有我的消化是0.25%胰酶+0.02%EDTA，消化的也不是很理想，比较难消化掉；我看赛业的培养消化是0.25%胰酶+0.04%EDTA，你的配方多少？

zhen022

回复 woshibotao_01 的帖子7 _' ]8 X7 v6 S; y1 y5 w

0 O. G* P: ?2 r9 |3 r都是一批血清，我得看看要不要加因子。

zhen022

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1 J3 q' O/ I, T: ~& q( Y6 v& E都是一批血清，我得看看要不要加因子。

zhen022

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1 L- L9 }) I, b& k# B3 ?! s6 `- b* [6 e8 n3 _6 c
也可能状态本身也不好。我的培养基是a-MEM，但是是hyclone的，之前用l-DMEM都不行，换了a-MEM形态不错，原代也长的可以，就是传到p2时候就不理想了。a-MEM要是用gibco的都得三四百，小贵啊。

zxd962735279

我用的是DF12,或者低糖的DMEM都行，养这个细胞，你可以试一试啊

bianpy

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+ \0 |1 m( M+ v/ ^4 M- Q# n0 Y我养的间充质干细胞，刚开始也很难消化，后来代数多了，纯了就很容易消化了。不过纯之前，长的也超级慢，状态也不好。