关于cik细胞补液与因子添加的请教

锋12

具体操作过程如下：9 G0 G+ }( e, ~, d6 Z
1、配制扩增液：所用的是X-VIVO15培养基（1L/瓶），2~8℃保存。取出避光恢复到常温后，从该整瓶培养基中取出1ml加入呈冻干粉状IL-2因子（2~8℃保存）的西林瓶里（100万IU/支），充分溶解后将成为液体状的IL-2因子全部转回到装有培养基的塑料瓶中，颠倒混匀后待用。$ J/ x+ A5 `+ @$ t* [; P
2、每次补液前，从2~8℃的冰箱中取出配制好的扩增液，恢复到常温后再使用，根据密度计算出所用体积后就添加到培养袋中。没有用完就重新放回到2~8℃保存（一般情况下1到2周内用完）。( c' b+ f# D7 v) J+ m8 _/ s6 y0 S
新人上路难免跑偏，诸多疑问请君见谅并不吝赐教，感谢大家！/ h0 j% J) L# X0 t" `0 V6 y8 W* d8 d
1、据文献和相关资料所说，补液过程要添加IL-2。正确执行文献和资料的做法是如同我上面所说的操作，还是在补液的那一刻培养基和IL-2分别单独添加？（个人理解分别单独添加对于维持IL-2因子的生物效价来说更可靠，毕竟液体状的因子和冻干粉状的因子相比，保存时间要短很多）。
+ u. v: ?( K8 p$ M, K4 Z+ e2、事先往培养基中加入了IL-2待用，没用完又放回2~8℃保存，一般来说该因子的有效浓度（生物效价）能够维持多久？
% Z/ o/ B0 h2 }1 `4 N$ F; s3、对于没用完的培养基，每次补液前都需要恢复到常温后再使用，反复多次进行这样的操作，IL-2的实际有效浓度是否还能达到最初配制时的1000IU/ml？（个人理解这样的操作很难长时间保证该扩增液维持最初的浓度，恐怕早就消失殆尽了吧）
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momoenn

养1份细胞14天-20天左右的周期，1瓶培养基通常是不够的。这么短的时间，基本不会对IL-2的效价造成影响

醉心科研

回复 锋12 的帖子
( j' Y4 b" H/ h0 y- m
& D6 L; Q, [% J; s1 @2 N# m我同意你的看法，应该每次现补。3 m1 q5 u# I8 g$ R  ?
可以头一次配成高浓度，用之前补进去。既不会很麻烦，也能保持生物活性。

zxd962735279

细胞因子配到培养基里面一般是会在一周左右使用完，细胞因子的活力不会有太大影响，另外可以再给细胞补液时直接先把培养基拿到室温，可以不用等到室温就可以用，只是温度不要太低就行。个人见解哦
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锋12

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6 D0 B% O0 l& u/ _1 J! s
* n+ _, A+ e7 C3 a/ O0 _" w好主意，配成高浓度的液体状因子确实有利于效价的维持，只要根据细胞悬液的体积直接添加适量的因子，无非也就是浪费几个枪头而已

锋12

回复 zxd962735279 的帖子$ N" N& y6 m$ X( ?- E7 U9 `8 r
7 o( A0 \6 O0 y/ E4 q- o
思路是很好的，我觉得对于加了因子的培养基最好还是减少“冷藏~复温”这个过程，加快操作并缩短其在常温中的停留时间，更好地维持着培养基的效价。如果光是普通的培养基没有加入因子的话，放在室温长一点关系也不大。

锋12

回复 momoenn 的帖子9 K; `. S6 t4 ]1 |; |7 g
1 b1 C& u* Z2 }. \) p# O
那就好，我可以放心的操作了。

zhengjianwei521

用多少加多少，用不完的不要了！

guanjun1314

我们的做法，就跟你们的一样，至于时间长短是否影响效果，我们是一瓶很快就用完的，不至于放太长时间