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具体操作过程如下:5 m$ k& ]' X/ p/ K7 H- ?4 h0 h
1、配制扩增液:所用的是X-VIVO15培养基(1L/瓶),2~8℃保存。取出避光恢复到常温后,从该整瓶培养基中取出1ml加入呈冻干粉状IL-2因子(2~8℃保存)的西林瓶里(100万IU/支),充分溶解后将成为液体状的IL-2因子全部转回到装有培养基的塑料瓶中,颠倒混匀后待用。
, l& U: }% [' w9 T0 b2、每次补液前,从2~8℃的冰箱中取出配制好的扩增液,恢复到常温后再使用,根据密度计算出所用体积后就添加到培养袋中。没有用完就重新放回到2~8℃保存(一般情况下1到2周内用完)。" Z* [- M E. e( C0 R: u4 S) \
新人上路难免跑偏,诸多疑问请君见谅并不吝赐教,感谢大家!
2 P) S* k# u: I1 w' |# f1、据文献和相关资料所说,补液过程要添加IL-2。正确执行文献和资料的做法是如同我上面所说的操作,还是在补液的那一刻培养基和IL-2分别单独添加?(个人理解分别单独添加对于维持IL-2因子的生物效价来说更可靠,毕竟液体状的因子和冻干粉状的因子相比,保存时间要短很多)。
* Q5 w! O9 E) P9 O5 b: x& q2 \2、事先往培养基中加入了IL-2待用,没用完又放回2~8℃保存,一般来说该因子的有效浓度(生物效价)能够维持多久?
2 F6 z( U: c4 E5 |# b3、对于没用完的培养基,每次补液前都需要恢复到常温后再使用,反复多次进行这样的操作,IL-2的实际有效浓度是否还能达到最初配制时的1000IU/ml?(个人理解这样的操作很难长时间保证该扩增液维持最初的浓度,恐怕早就消失殆尽了吧)
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