请教关于小鼠胚胎干细胞的培养问题

不倒翁

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养ES的时候可以铺feeder（就是文章中说的秋水仙素处理后不能分裂的MEF），也可以包被gelatin，是两种不同的方法。一般来讲feeder上的ES长得更好，贴壁情况也更好。gelatin的话有些细胞系是不可以在这上面维持的。knockout DMEM是一种DMEM培养基

不倒翁

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我们一般就用普通的高糖DMEM，没有用knockout DMEM。关于feeder看你的实验需要。feeder上ES维持的状态会好一点，但是有些实验是不能用feeder的，所以就需要把ES和feeder分离开。用差速贴壁的方法可以将两者分离开：传代时，将消化的好的ES用ES培养基重悬，种到gelatin包被的盘里，贴壁半小时到一小时，此时feeder已贴壁，ES还是重悬状态，小心将培养基吸出，离心，沉淀即为ES细胞，feeder还留在盘里。如果想去feeder去的干净一点，可以适当延长贴壁时间。普通传代时不需要将两者分离，正常消化计数传代即可。

不倒翁

sorry，feeder是丝裂霉素C处理，不是秋水仙素 ，sorry

不倒翁

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; G% ?/ P1 Y  }5 w' W! I嗯 可以 铺feeder养的话要提前铺好feeder，至少五小时以前铺上，尽量过夜。密度要适当，以MEF铺展开来刚好能覆盖培养皿为宜。消化下来的细胞里面混杂的feeder占得比例非常小，普通传代时可以忽略
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不倒翁

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6 z$ w3 \1 {+ R关于悬滴法这里有一篇文章，文章还附有一个视频，操作讲的很详细 你课可以学习一下

不倒翁

不管什么方法都是在细菌培养皿里做的 因为EB要悬浮培养，细菌培养皿是没用包被的 细胞不会贴壁。 除了悬滴法，还有普通的方法（将去掉feeder的ES直接种到细菌培养皿里，加上分化培养基），这种方法简单，但是长出来的EB会大小不均匀，实验结果不稳定，所以我建议用悬滴法比较高，麻烦一点 但是不难