绵羊脐带间充质干细胞，让我郁闷的无文献摸索

皮搋子

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小弟开始做绵羊的脐带间充质干细胞了！
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0 F$ u5 R# n% ^# [) N+ C/ x话说这绵羊的脐带和人的还真是不一样啊，人的脐带是一个手指头粗的管子，而绵羊是那种透明的黏黏的软胶包裹着4个管子。刚开始的时候没经验，第一根我就按照人脐带的处理办法把上面的粘液弄的干干净净，然后消化了之后我悲催的发现，啥都木有。。。
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  v0 h1 w) d$ q第二回老实了，把那个黏黏的东西留着，据同事估计，这玩意就是华通胶（Wharton’s jelly），一次做了2根脐带。
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有一根脐带特别争气，别的细胞还在稀稀拉拉的长的时候，它5天就长满了一瓶子，175cm的大瓶子啊！！！！真给力！！！形态还特别好！！！
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它还长成了2层，没说的，直接1传10；
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& g, e, U# S$ Z; r/ `1 ?消化的时候问题来了，上面那层胰酶3分钟就消化下来了，可是下面那层却是纹丝不动。两层细胞长的一模一样，我犯难了。
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不管了，先把上面的细胞给分瓶了再说。4 q0 t9 ?  _) t/ a: g

" z& F, p) E" y: G6 S/ ^& O& Z/ z回头再看瓶底的细胞，胰酶浓度0.25%直接上原液。10分钟后，终于下来了，现在我彻底傻眼了，到底上面的是绵羊的Msc还是下面的是？？？？
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2 ?% e' T) g# @  ^1 N) \9 |4 Y我把下面这层也放起来培养着。。。
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# h6 u! G$ _" ?- L; B. H目前寻找鉴定方法，因为我们没有流式细胞仪。不要劝我查文献，做绵羊脐带干细胞的小弟是第一人。( i( b- y+ x1 z3 R: `1 m4 A! Q

4 ^* Y  g% |2 J  d* U" t就算是做表型鉴定，请问绵羊的脐带间充质干细胞哪些表达，哪些不表达？/ ]. I; g4 I& u2 _+ ~3 I

, r  z# A, `- q" H好吧，上图吧。图片有点多，请耐心等待。  N9 i  y0 Q) p; B
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背景亮的是传代后的。
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皮搋子

回复 皮搋子 的帖子2 c6 V$ ~, g, L+ i& A1 O
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我会将做的时候遇到的事情一点点的写出来，给有像我这样误入歧途的同学提个醒：细胞是万恶的，干细胞是万恶中的万恶！
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比如那个脐带问题，人的是大约直径8-10mm的厚壁管子，按照教科书的办法就是把血管剥离下来，然后把组织给剪碎了消化。
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看到绵阳的我傻眼了，4根粗细大约有3mm的白色管子，上面裹着1mm厚的和果冻差不多的东西，用辅料镊一噜就干干净净，下面剩的东西酷似血管，你说我该怎么办？？？撕开？别扯了，这么细的玩意。
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1 c4 q8 |  g, g& @% j; e没办法，我直接给剪成碎片消化了，后来养细胞的时候细胞分成两层，下面那层难消化的我估计就是这个原因。
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什么原因呢？别人做的时候是挑去血管，而我这由于不能肯定那个是什么玩意，所以直接消化，导致血管的内皮细胞上皮细胞什么的全部下来了，下面那层难消化的就是这个东西。这是我的推测啊。3 S6 e5 a" z" x0 e5 d- }

2 W: {# a4 b9 I  c3 s7 C. Y5 t唉，焦虑啊，一个问题接一个问题的。
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2 s. q2 E+ Y0 v2 U+ V0 }7 |: O明天我会出续集，讲讲下面我遇到的问题和我更大的焦虑。

皮搋子

谢谢各位，我准备开始做诱导分化了。

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# }4 R& S6 ~# j) R+ f8 e第5天就长的密密麻麻分成了2层。

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! C3 a1 J7 _" o, {. K# J0 E请问你也是养的绵羊间充质？能加qq交流嘛？