绵羊脐带间充质干细胞，让我郁闷的无文献摸索

皮搋子

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小弟开始做绵羊的脐带间充质干细胞了！" n8 r0 ]. q' c

' A& O3 r- ^2 D/ S$ L5 o话说这绵羊的脐带和人的还真是不一样啊，人的脐带是一个手指头粗的管子，而绵羊是那种透明的黏黏的软胶包裹着4个管子。刚开始的时候没经验，第一根我就按照人脐带的处理办法把上面的粘液弄的干干净净，然后消化了之后我悲催的发现，啥都木有。。。6 O2 k* y0 B2 a8 @* o

% L3 O6 c0 r+ ~( v; w& m第二回老实了，把那个黏黏的东西留着，据同事估计，这玩意就是华通胶（Wharton’s jelly），一次做了2根脐带。6 p7 T. R6 f* x9 N  R% a0 l
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有一根脐带特别争气，别的细胞还在稀稀拉拉的长的时候，它5天就长满了一瓶子，175cm的大瓶子啊！！！！真给力！！！形态还特别好！！！3 ?8 V" Q. B3 E4 H2 ?/ s  L2 k- ~

; U1 m  E! t1 S9 d它还长成了2层，没说的，直接1传10；0 Y/ e! Z! c% u

" \. [1 \# W8 O/ D9 `. `0 U! o消化的时候问题来了，上面那层胰酶3分钟就消化下来了，可是下面那层却是纹丝不动。两层细胞长的一模一样，我犯难了。- Y' Q: s' e% E( s2 a! U
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不管了，先把上面的细胞给分瓶了再说。
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回头再看瓶底的细胞，胰酶浓度0.25%直接上原液。10分钟后，终于下来了，现在我彻底傻眼了，到底上面的是绵羊的Msc还是下面的是？？？？; S7 p- Y' V1 E8 Y6 t
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我把下面这层也放起来培养着。。。# M( J& j4 i- z) e* ~& t  F
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目前寻找鉴定方法，因为我们没有流式细胞仪。不要劝我查文献，做绵羊脐带干细胞的小弟是第一人。
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就算是做表型鉴定，请问绵羊的脐带间充质干细胞哪些表达，哪些不表达？( n$ W) R8 u! t7 }* G6 H
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好吧，上图吧。图片有点多，请耐心等待。
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背景亮的是传代后的。; g* M! Y0 P1 c( D* g, t5 m. w2 Y
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tangyvhuang

围观吧，不知道啊，

siyue13

占个楼，围观
7 n& p+ q, o1 P* }: G5 X1 N) \皮兄，加油啊

siyue13

流式！流式！
) S% ~! L) g5 x4 C" ^* e流式！流式！

皮搋子

回复 皮搋子 的帖子
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我会将做的时候遇到的事情一点点的写出来，给有像我这样误入歧途的同学提个醒：细胞是万恶的，干细胞是万恶中的万恶！
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比如那个脐带问题，人的是大约直径8-10mm的厚壁管子，按照教科书的办法就是把血管剥离下来，然后把组织给剪碎了消化。
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6 _: x' Z$ W2 P4 q. {( D# l看到绵阳的我傻眼了，4根粗细大约有3mm的白色管子，上面裹着1mm厚的和果冻差不多的东西，用辅料镊一噜就干干净净，下面剩的东西酷似血管，你说我该怎么办？？？撕开？别扯了，这么细的玩意。
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7 G8 D' N% T: g9 T  m没办法，我直接给剪成碎片消化了，后来养细胞的时候细胞分成两层，下面那层难消化的我估计就是这个原因。  Z* F2 w6 \5 }& L" [5 ]$ ]

* f; R: a* l3 A% ^, @6 [6 d什么原因呢？别人做的时候是挑去血管，而我这由于不能肯定那个是什么玩意，所以直接消化，导致血管的内皮细胞上皮细胞什么的全部下来了，下面那层难消化的就是这个东西。这是我的推测啊。! }% z% w; R$ h$ y# q

$ L% }0 h# ]. E6 S: z7 P; {3 a唉，焦虑啊，一个问题接一个问题的。* `0 U3 s( I' V7 f4 L

/ d- [, \6 k: c4 j$ m+ |明天我会出续集，讲讲下面我遇到的问题和我更大的焦虑。

guosapphire

建议直接做诱导分化试验，因为无论做流式还是免疫荧光，都需要有丰富且合适的抗体，绵羊估计这类抗体不多，即使有你也需要有订购等待时间，而且干细胞最为关键的地方在于其多能性，你是逃不过检验其分化能力的试验的。而且不同物种和组织的MSC其表面标记也会不一样，做流式的目的我想更多是为了描述你的细胞，但是要认定你的细胞是干细胞还需要证明其分化的多能性。9 y! G" Q: M  z! ^4 B3 U
做脂肪分化和成骨分化都会有比较明显的表观特征，可以帮助你直观的掌握试验进展。
5 @2 @7 N: ~6 B& D一点拙见，希望对你有帮助。

get0715

我曾经也遇到过做从来没人做过的干细胞的实验，也很头疼，在此深表同情，哈哈！
1 o1 U4 @, F! F如果你不确定哪些是华侬氏胶（Wharton’s jelly），哪些是血管，那你就索性把你说的外面黏黏的东西和里面的细管分开处理，看是否还会有长成两层细胞的情况。
) K  m# d! W' r6 m! q, F& c你的细胞时原代时就长成两层么？多少天长成两层的呀？如果还有这样的情况，建议原代的时候早些传代，见有局部生长状态良好的时候就可以传代，一个小瓶传一个大瓶的比例，试一下。可能能解决你细胞分层的问题。) x8 m% t3 U! t% w* a; }, ~7 M2 k
羊的抗体应该很少，不过可能还是会找到的，那时我找抗体的时候偶尔会找到抗羊的抗体，先按人脐带间充质干细胞的表型先找两三个代表性标记试试吧。实在找不到，楼上的老师给的建议还是挺实用的，诱导分化的方法应该大同小异，还是很可行的，起码证明了是不是干细胞。
* I0 ]+ r. F$ h有不对的地方希望大家指出！共同进步！

haoxinaok

路过，学习！

fengxuechunyang

路过，学习了！赞成诱导分化，周期有点长，但是最能证明是否是干细胞。流式可以择机进行，但是还要选择合适的抗体。

皮搋子

谢谢各位，我准备开始做诱导分化了。