绵羊脐带间充质干细胞，让我郁闷的无文献摸索

皮搋子

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小弟开始做绵羊的脐带间充质干细胞了！$ h( a; Y* X! o3 M+ H( ]

* L/ o+ z( I, s! P8 C3 g话说这绵羊的脐带和人的还真是不一样啊，人的脐带是一个手指头粗的管子，而绵羊是那种透明的黏黏的软胶包裹着4个管子。刚开始的时候没经验，第一根我就按照人脐带的处理办法把上面的粘液弄的干干净净，然后消化了之后我悲催的发现，啥都木有。。。
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第二回老实了，把那个黏黏的东西留着，据同事估计，这玩意就是华通胶（Wharton’s jelly），一次做了2根脐带。
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有一根脐带特别争气，别的细胞还在稀稀拉拉的长的时候，它5天就长满了一瓶子，175cm的大瓶子啊！！！！真给力！！！形态还特别好！！！! G, P# l. t* |) K, u  ^7 T
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它还长成了2层，没说的，直接1传10；! ~# I' n) e  F1 b

- L' O3 ?, ]# `. h6 J: E3 B9 C消化的时候问题来了，上面那层胰酶3分钟就消化下来了，可是下面那层却是纹丝不动。两层细胞长的一模一样，我犯难了。" ?% F& n& h: t: U5 d6 T7 `

+ I. ~: L; ~4 e不管了，先把上面的细胞给分瓶了再说。* i. ]7 U8 k9 x; ^: V
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回头再看瓶底的细胞，胰酶浓度0.25%直接上原液。10分钟后，终于下来了，现在我彻底傻眼了，到底上面的是绵羊的Msc还是下面的是？？？？" a& L: b$ {% y8 p

, F2 s$ e* S9 j' d# k% `我把下面这层也放起来培养着。。。" s( {* I  ?' U- V

& c" F- p) _3 a目前寻找鉴定方法，因为我们没有流式细胞仪。不要劝我查文献，做绵羊脐带干细胞的小弟是第一人。
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就算是做表型鉴定，请问绵羊的脐带间充质干细胞哪些表达，哪些不表达？
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5 S1 e' e8 G! h8 m: Y  e4 h好吧，上图吧。图片有点多，请耐心等待。
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# _, j9 @7 [) }' Y9 d; C- F8 u背景亮的是传代后的。% u# b/ O! p. g

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皮搋子

回复 皮搋子 的帖子) \5 ]% y0 _) w) }8 j
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我会将做的时候遇到的事情一点点的写出来，给有像我这样误入歧途的同学提个醒：细胞是万恶的，干细胞是万恶中的万恶！
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比如那个脐带问题，人的是大约直径8-10mm的厚壁管子，按照教科书的办法就是把血管剥离下来，然后把组织给剪碎了消化。
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看到绵阳的我傻眼了，4根粗细大约有3mm的白色管子，上面裹着1mm厚的和果冻差不多的东西，用辅料镊一噜就干干净净，下面剩的东西酷似血管，你说我该怎么办？？？撕开？别扯了，这么细的玩意。
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  i* K% P( Q* J1 q4 ~% Q没办法，我直接给剪成碎片消化了，后来养细胞的时候细胞分成两层，下面那层难消化的我估计就是这个原因。; H4 N0 ]! R' B7 h9 @8 A: z

0 V0 \- ]( Z* \什么原因呢？别人做的时候是挑去血管，而我这由于不能肯定那个是什么玩意，所以直接消化，导致血管的内皮细胞上皮细胞什么的全部下来了，下面那层难消化的就是这个东西。这是我的推测啊。) d( Z  B0 [3 P" _1 j
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唉，焦虑啊，一个问题接一个问题的。  L. I) x$ {2 f0 S) C) E  L9 @
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明天我会出续集，讲讲下面我遇到的问题和我更大的焦虑。

皮搋子

谢谢各位，我准备开始做诱导分化了。

皮搋子

回复 get0715 的帖子1 l  N; U2 O+ z
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第5天就长的密密麻麻分成了2层。

皮搋子

回复 hanbing 的帖子3 h; X( ]- k; H* Y8 I3 K! P9 j
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请问你也是养的绵羊间充质？能加qq交流嘛？