绵羊脐带间充质干细胞，让我郁闷的无文献摸索

皮搋子

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小弟开始做绵羊的脐带间充质干细胞了！
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0 K0 v# m! r% K- K* e0 m* t, M话说这绵羊的脐带和人的还真是不一样啊，人的脐带是一个手指头粗的管子，而绵羊是那种透明的黏黏的软胶包裹着4个管子。刚开始的时候没经验，第一根我就按照人脐带的处理办法把上面的粘液弄的干干净净，然后消化了之后我悲催的发现，啥都木有。。。
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6 f- Q8 [! b) H第二回老实了，把那个黏黏的东西留着，据同事估计，这玩意就是华通胶（Wharton’s jelly），一次做了2根脐带。4 _2 i: T3 ^/ [. r% r( n! H; c

3 p. Y0 G) a3 @5 q: d* y* F有一根脐带特别争气，别的细胞还在稀稀拉拉的长的时候，它5天就长满了一瓶子，175cm的大瓶子啊！！！！真给力！！！形态还特别好！！！
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它还长成了2层，没说的，直接1传10；9 ?& w. S3 F; O  N8 n9 X  @. q

  |  T7 m( S/ u& {消化的时候问题来了，上面那层胰酶3分钟就消化下来了，可是下面那层却是纹丝不动。两层细胞长的一模一样，我犯难了。
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$ n; D$ h# b) ~不管了，先把上面的细胞给分瓶了再说。
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* r& R6 H- s" e2 t1 k回头再看瓶底的细胞，胰酶浓度0.25%直接上原液。10分钟后，终于下来了，现在我彻底傻眼了，到底上面的是绵羊的Msc还是下面的是？？？？! U/ z* y! Y. ~3 ^- C& v! P8 C8 g
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我把下面这层也放起来培养着。。。
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/ F$ M3 N7 G6 c4 C9 q# A3 s目前寻找鉴定方法，因为我们没有流式细胞仪。不要劝我查文献，做绵羊脐带干细胞的小弟是第一人。* y6 W, r5 F" D% |$ ^; s& r
  G! J& n. u1 z( j- r/ a
就算是做表型鉴定，请问绵羊的脐带间充质干细胞哪些表达，哪些不表达？
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( v" b/ G% F# x8 T7 _5 l& z好吧，上图吧。图片有点多，请耐心等待。
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8 d+ X8 v0 }" c" Y9 U' F背景亮的是传代后的。
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细胞干

回复 皮搋子 的帖子2 W7 m: |& V3 V# \; K
  s/ @( ]% N, J( g- P- {% L
小弟最近开始准备做羊的脐带，但是不知道羊的脐带什么样？请问大侠能贴几张羊脐带的照片吗？

robort45

一般粘性超强的，都属于分化了的细胞，不再具有干性，那个消化不下来的可能是巨噬细胞，而且你消化下来的细胞也要考虑是不是内皮祖细胞，要鉴定后才有说服力，可测测CD31，如果没有流式就用免疫显色之类的也行

pekingxiaoe

我以前也想做羊的，可是做流式的时候有羊的那么多抗体吗？

hanbing

回复 皮搋子 的帖子
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QQ：1107148263

皮搋子

回复 hanbing 的帖子/ b4 i$ x' Y% B  t  w
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请问你也是养的绵羊间充质？能加qq交流嘛？

hanbing

我做了流式，高表达CD106 CD44 CD29  不表达CD45CD35CD71，基本判定是间充质来源的

get0715

回复 皮搋子 的帖子8 j# `! V7 i, W7 U- Q1 h

, I( c7 t! u/ q4 E6 Q接种密度大概在多少？这五天长的那么快么？

皮搋子

回复 get0715 的帖子* F" a4 o6 X( G( @/ ]4 R. r
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第5天就长的密密麻麻分成了2层。

皮搋子

谢谢各位，我准备开始做诱导分化了。