关于MSCs的诱导内皮和成骨诱导

kgx1986

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1 b& a/ z' C( d9 c: E7 q& T; s      我现在在做MSCs的诱导内皮和成骨诱导，因为实验室没有人做过，师兄师姐都毕业了，所以全靠自己一个人摸索，恳请大家帮帮忙，给予我一些指导，也能让有同样困惑的同学得到启发，同时也活跃论坛氛围。) G  z2 w3 s6 n% f
    首先，我做向内皮细胞诱导的困惑——细胞接种密度控制在多少比较合适？诱导过程中细胞或不断生长会不会造成密度过大？密度过大导致细胞叠加会不会严重影响诱导效果？下面是我诱导10天的图片，有些地方细胞细胞密集，形态都挤的变形了（之前细胞很均匀，典型的长梭形）。如图
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4 d. X! I4 ?- ]& p. b: y/ x& v    我做成骨诱导的过程中，发现细胞在诱导过程中会有死亡，并且会出现一些黑色的东西，并且用PBS洗不掉，我觉得应该是细胞死亡后细胞核一类的东西。上次做诱导染完色好像效果很不理想，论坛里其他老师说应该诱导不成功，这次诱导了十多天了，情况比上次好点，但还是有细胞死亡和黑色的东西。不知道各位老师诱导时会不会出现这种情况，希望给予指点，不胜感激！所说情况如图

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大家关注一下吧，难道没有人做这方面的工作？内皮分化诱导人做得比较少还可以理解，但成骨诱导应该做间充质的很多人都要做的吧，试验正在进行，恳请大家指导呀！！

kgx1986

回复 dragon513 的帖子
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, f$ @$ E/ l/ q  {8 \4 `% u7 f诱导开始的时候，密度很好，诱导过程中，细胞还在继续增殖，我也在纳闷，不是细胞生长过程中有接触抑制吗？为什么还会长的这么多呀？看来长不好烦心，长得太好也烦心。

kgx1986

回复 踏雪寻梅 的帖子) L7 G( p! f- B* K- d0 G
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最简单的基础培养基加诱导因子，VEGF+bFGF

kgx1986

回复 dragon513 的帖子5 T# u  [- j; w. {
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现在我在想，是不是因为我加了诱导剂才致使细胞形态发生改变了？！

kgx1986

回复 可怜的孩子 的帖子
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我是北京的，细胞来源为兔子骨髓间充质干细胞

kgx1986

回复 luoziwei 的帖子
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3 B8 Q7 k* A6 g2 D% v& |( g多谢指导。如果确实如此，那就太好了。

kgx1986

回复 luoziwei 的帖子
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谢谢你的指导，如果可以的话，可以把图片发到我的邮箱kmk1986@163.com,谢谢!

kgx1986

回复 luckywen 的帖子
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1 F% Q( a$ ^& l& g首先谢谢你参与讨论。) Y8 D! V0 q' }" z7 _
我用的是P3代细胞，起始密度是1X105个，因子量VEGF10ng/ml,bFGF4ng/ml，从诱导开始，细胞还是在增殖，我现在觉得这种情况不仅仅是细胞密度大的问题，细胞形态也发生了改变，但不像其他人低密度诱导时细胞稀疏，每个细胞之间留有空隙！？我的培养板中，高密度区周边的细胞相对以前，核浆比例增大，这种情况在文献上也有出现。
3 J7 `6 q- F( o0 t% mbFGF的作用不仅仅是促进细胞增殖吧，在诱导体系中还有其他作用，我觉得加bFGF还是需要的。