关于MSCs的诱导内皮和成骨诱导

kgx1986

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( X! c0 k4 M  H& c$ ^* g9 ^      我现在在做MSCs的诱导内皮和成骨诱导，因为实验室没有人做过，师兄师姐都毕业了，所以全靠自己一个人摸索，恳请大家帮帮忙，给予我一些指导，也能让有同样困惑的同学得到启发，同时也活跃论坛氛围。
1 U( a7 K, n+ Y/ ?7 [    首先，我做向内皮细胞诱导的困惑——细胞接种密度控制在多少比较合适？诱导过程中细胞或不断生长会不会造成密度过大？密度过大导致细胞叠加会不会严重影响诱导效果？下面是我诱导10天的图片，有些地方细胞细胞密集，形态都挤的变形了（之前细胞很均匀，典型的长梭形）。如图( ]" r( V& x: k' d% c8 o) t: C2 n

* H  K3 f( ]+ }+ X$ c6 g* p) f2 N    我做成骨诱导的过程中，发现细胞在诱导过程中会有死亡，并且会出现一些黑色的东西，并且用PBS洗不掉，我觉得应该是细胞死亡后细胞核一类的东西。上次做诱导染完色好像效果很不理想，论坛里其他老师说应该诱导不成功，这次诱导了十多天了，情况比上次好点，但还是有细胞死亡和黑色的东西。不知道各位老师诱导时会不会出现这种情况，希望给予指点，不胜感激！所说情况如图

meister

得染色鉴别

kgx1986

大家关注一下吧，难道没有人做这方面的工作？内皮分化诱导人做得比较少还可以理解，但成骨诱导应该做间充质的很多人都要做的吧，试验正在进行，恳请大家指导呀！！

dragon513

这个密度恐怕也太高了吧

kgx1986

回复 dragon513 的帖子4 J" a3 |5 j! `; ^; O
: \- ^. N4 s. _- f
诱导开始的时候，密度很好，诱导过程中，细胞还在继续增殖，我也在纳闷，不是细胞生长过程中有接触抑制吗？为什么还会长的这么多呀？看来长不好烦心，长得太好也烦心。

踏雪寻梅

我想知道楼主诱导内皮细胞用的什么配方？

dragon513

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( s' W9 F( h# e+ a5 P# b- J7 T, `) T" V4 h" E
我记得我做成骨诱导的时候细胞会发生聚集，形态变成多角形，不大好看了。成内皮分化没做过，但诱导成脂和成骨时细胞好象没有无限制的增殖呀。

kgx1986

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最简单的基础培养基加诱导因子，VEGF+bFGF

kgx1986

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现在我在想，是不是因为我加了诱导剂才致使细胞形态发生改变了？！

可怜的孩子

你是哪里的？用的是什么种属的细胞？