关于MSCs的诱导内皮和成骨诱导

kgx1986

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/ W  o) m4 O/ h( b我是北京的，细胞来源为兔子骨髓间充质干细胞

menghy

个人觉得楼主可以将你的实验方案列的更详细些，比如来源，细胞浓度，时间，诱导培养基成分等。
. |% d3 p  @" e' `成骨诱导一般不加EGF和VEGF，14天左右，你可以染色监督下，大部分文献报道的诱导方案成分都差不多。
6 _5 g+ Z( J9 y# e; W( m接触性抑制是有的，但是不可能完全的达到抑制，只是增殖的时间和数量降低了一些而已。

可怜的孩子

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上海九院骨科实验室有个组专门做这个，成骨成血管双向诱导分化，复合后用于骨再生。你可以找他们文章看看。我认为首先确定你的细胞是否正确，确定是相对较纯的骨髓间充质。成血管诱导可以使用ECM内皮细胞基础培养基（比较贵）加不同浓度VEGF进行诱导，CD31，CD34免疫组化检测。成骨就是用普通DX诱导液，7天ALP染色，14-21天钙结节染色（硝酸银或茜素红）。钙结节染色时不用传代了，即使长得很满，可以隔天换液。

luoziwei

鄙人觉得成骨诱导细胞变黑属正常现象，那是钙化开始的特征

kgx1986

回复 luoziwei 的帖子5 D% j, Q1 H/ ~; y' g7 X) L" W

1 s/ c5 e( V! ?, N多谢指导。如果确实如此，那就太好了。

luoziwei

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一般在诱导15天后，去掉培养液并在显微镜下观察，你会发现除了黑点外，局部还有一些发亮的圆斑点，就像基因转化生长的蓝白斑一样，那就是钙结节。我有一个图，你可以看看。

luoziwei

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9 d8 }  O5 ]) h上传不了图片！！

kgx1986

回复 luoziwei 的帖子  {" k) m8 S) r# s( @) i
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谢谢你的指导，如果可以的话，可以把图片发到我的邮箱kmk1986@163.com,谢谢!

luckywen

请问你选择的是第几代进行内皮诱导的呢？诱导起始密度如何？添加因子的量？看照片感觉密度过高,还有必要加bFGF吗？

kgx1986

回复 luckywen 的帖子  s) v" r$ V* l/ b( W  i: R  Z: _
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首先谢谢你参与讨论。
. z" ?3 z* S( t0 z( R我用的是P3代细胞，起始密度是1X105个，因子量VEGF10ng/ml,bFGF4ng/ml，从诱导开始，细胞还是在增殖，我现在觉得这种情况不仅仅是细胞密度大的问题，细胞形态也发生了改变，但不像其他人低密度诱导时细胞稀疏，每个细胞之间留有空隙！？我的培养板中，高密度区周边的细胞相对以前，核浆比例增大，这种情况在文献上也有出现。& Z4 o0 X/ \+ P- ]) L0 [
bFGF的作用不仅仅是促进细胞增殖吧，在诱导体系中还有其他作用，我觉得加bFGF还是需要的。