干细胞培养污染了吗

mayiwaiwai

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最近复苏的干细胞总是这个样子，速度慢，形态还不好，有泡泡的东西在边上，师兄说是不是支原体污染，不知什么原因？3 f( ^+ a: ~. _4 q! v
无饲养层培养的E14，冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗？
3 K9 `4 w' Q3 ^0 b3 R. p) O: _; G这样的细胞传代过程中，胰酶消化后不是单个细胞，会粘在一起，明显的一块，这是污染的表现吗？6 X4 W5 u1 X" h. ~8 \. V
细胞粘附性是降低的，用PBS洗的话就会脱落呢，
8 }- a1 j% i! C' {* f求指点。。。555

mayiwaiwai

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mayiwaiwai

回复 XIE冬D 的帖子
1 U) ~' f2 s- ~: R: s& ]$ ?
" k0 Z: t  b$ n( j7 C这是冻存的细胞出现这样，之前的没有这种情况，虽然也会抱团，但是长出来的形态还是好的，基本2天就要传代的，现在长的好慢，基本要3-4天的样子，做sphere的分化也不好，基本长不出来，就想知道我的细胞肿么啦。。。。。

mayiwaiwai

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附一张冻存之前的ES，冻存后复苏怎么就不行了呢

mayiwaiwai

回复 XIE冬D 的帖子
5 T+ `$ D3 \- [4 R* T3 Q. Q' A3 o7 S* B9 D# _" k$ y
还没有传过代，难道是冻存的时候消化过度，或者你说的吹打过度，

mayiwaiwai

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某种污染，修整中。。。心痛啊。实验啊

mayiwaiwai

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5 |/ X; ~# N& S* j7 {* O回复 sszxlijin 的帖子
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E14培养，培养基中加了2i， 最近出现了问题，具体你可以参考应其龙老师的文章，在我其他的帖子中有的，严谨操作呀，谨慎谨慎

mayiwaiwai

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回复 watchen198891 的帖子( Z1 n7 G% _' s5 U0 q  z
7 t1 c& ~! M6 m; s; u
在3代细胞的边上看着会有絮状的漂浮物，不知从何而来，细胞长的慢，第四代细胞就基本长不起来了，贴壁性也下降，很容易就脱壁。还在找原因，我会再复苏一只试试，谢谢指点。。。

mayiwaiwai

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0 g* W6 j. W% z/ Q( `1 n) ~* U回复 老姜 的帖子
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这是贴壁培养的E14，悬浮培养的细胞球跟这个很像

mayiwaiwai

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回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=846460&ptid=66988]老姜 的帖子[/u6 o8 m9 I# O! b- E3 o: h# x" Y: d
具体怎么建立起来的不清楚只知道是细胞系的名字，像R1、D3