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干细胞培养污染了吗  

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包包
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发表于 2013-4-17 11:43 |显示全部帖子
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-17 11:52 编辑
! @6 v4 K- R/ _6 q+ O8 k+ l0 t+ {* s+ \' D0 t
最近复苏的干细胞总是这个样子,速度慢,形态还不好,有泡泡的东西在边上,师兄说是不是支原体污染,不知什么原因?$ @9 `( h9 R0 w9 ~
无饲养层培养的E14,冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗?/ z+ r8 c8 h( |8 D9 `
这样的细胞传代过程中,胰酶消化后不是单个细胞,会粘在一起,明显的一块,这是污染的表现吗?
! s" D$ J4 T9 n# B9 ]9 [细胞粘附性是降低的,用PBS洗的话就会脱落呢,$ g2 G  u" C8 T8 M. G
求指点。。。555
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发表于 2013-4-17 11:47 |显示全部帖子

- Z' j; ?6 d3 ?) M3 W
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发表于 2013-4-17 12:36 |显示全部帖子
希瑞干细胞
复苏细胞黏附抱团现象,细胞不好存活。可以试试用dispase2酶消化,使单个细胞分散开来再接种培养。这个酶相对胰蛋白酶和胶原酶比较温和,对细胞膜损伤小。一般情况下用培养基稀释即可终止反应。
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-4-17 12:38 |显示全部帖子
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没有污染。鉴定完毕。
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发表于 2013-4-17 14:04 |显示全部帖子
我刚开始养的小鼠ES也有这样的情况,大概就是细胞消化过度,及吹打造成机械损伤。我们实验室现在很少使用胰酶消化,除了做原代做feeder。
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发表于 2013-4-17 14:45 |显示全部帖子
回复 XIE冬D 的帖子
4 C: V/ ]9 S2 G4 Q& T/ S$ J& l/ P* J  u4 E
这是冻存的细胞出现这样,之前的没有这种情况,虽然也会抱团,但是长出来的形态还是好的,基本2天就要传代的,现在长的好慢,基本要3-4天的样子,做sphere的分化也不好,基本长不出来,就想知道我的细胞肿么啦。。。。。
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发表于 2013-4-17 14:54 |显示全部帖子

/ b# v; q( c; h* J5 g附一张冻存之前的ES,冻存后复苏怎么就不行了呢
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发表于 2013-4-17 16:37 |显示全部帖子
回复 XIE冬D 的帖子
* P6 ^0 J9 @" \1 l2 X! X# E# T3 y3 N, a; V/ G
还没有传过代,难道是冻存的时候消化过度,或者你说的吹打过度,

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发表于 2013-4-17 17:06 |显示全部帖子
个人觉得有可能是消化过度造成的。
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发表于 2013-4-18 21:18 |显示全部帖子
跟楼主养的一样的细胞E14 无滋养层 明胶包被的 最近老分化。看楼主养的挺好,想问问楼主点经验。谢谢
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