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干细胞培养污染了吗  

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发表于 2013-4-17 11:43 |显示全部帖子
本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-4-17 11:52 编辑 7 s9 q: b7 T% X+ O; g$ y

0 v6 n# ?  Q9 B9 k3 d- |最近复苏的干细胞总是这个样子,速度慢,形态还不好,有泡泡的东西在边上,师兄说是不是支原体污染,不知什么原因?
8 O1 P6 S" l/ j9 y. g无饲养层培养的E14,冻存使用的是90%FBS+10%DMSO。难道是冻存过程中污染掉了吗?$ C2 \- I2 R4 n$ @: \
这样的细胞传代过程中,胰酶消化后不是单个细胞,会粘在一起,明显的一块,这是污染的表现吗?6 t, Y* c/ c6 A2 W2 ], H& {' U, f% }! D
细胞粘附性是降低的,用PBS洗的话就会脱落呢,
, e# `" {/ Y9 T6 |( t# x* S求指点。。。555
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发表于 2013-4-17 11:47 |显示全部帖子

1 q& K+ ~  P9 p, u% l3 {: A; b3 r
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发表于 2013-4-17 12:36 |显示全部帖子
希瑞干细胞
复苏细胞黏附抱团现象,细胞不好存活。可以试试用dispase2酶消化,使单个细胞分散开来再接种培养。这个酶相对胰蛋白酶和胶原酶比较温和,对细胞膜损伤小。一般情况下用培养基稀释即可终止反应。
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-4-17 12:38 |显示全部帖子
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没有污染。鉴定完毕。
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发表于 2013-4-17 14:04 |显示全部帖子
我刚开始养的小鼠ES也有这样的情况,大概就是细胞消化过度,及吹打造成机械损伤。我们实验室现在很少使用胰酶消化,除了做原代做feeder。
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发表于 2013-4-17 14:45 |显示全部帖子
回复 XIE冬D 的帖子5 M/ r% x4 C3 n  z! x% ~# k
# g0 |0 Y# e) s# x. g2 l
这是冻存的细胞出现这样,之前的没有这种情况,虽然也会抱团,但是长出来的形态还是好的,基本2天就要传代的,现在长的好慢,基本要3-4天的样子,做sphere的分化也不好,基本长不出来,就想知道我的细胞肿么啦。。。。。
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发表于 2013-4-17 14:54 |显示全部帖子
1 q3 w+ ?1 j) m) D% e0 f
附一张冻存之前的ES,冻存后复苏怎么就不行了呢
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发表于 2013-4-17 16:37 |显示全部帖子
回复 XIE冬D 的帖子
( R2 F" h2 e+ b: `1 y: S: i! E# F7 ]9 @% V- N( d
还没有传过代,难道是冻存的时候消化过度,或者你说的吹打过度,

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发表于 2013-4-17 17:06 |显示全部帖子
个人觉得有可能是消化过度造成的。
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发表于 2013-4-18 21:18 |显示全部帖子
跟楼主养的一样的细胞E14 无滋养层 明胶包被的 最近老分化。看楼主养的挺好,想问问楼主点经验。谢谢
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