细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
, ^; D2 g5 D$ b- r3 A取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。
, p; T1 }% H% ]# z; i2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？: j: N4 u7 e! W% O( o8 @
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。( R8 ^# q4 f! r: H" t2 ~
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？
$ W/ p+ b: r0 B- @* ~, c不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
4 L8 |: U+ s' B4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？; S0 n+ z1 B: _, [+ b$ s' G1 L
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。3 Y- l4 z  p1 ^: a! f  h* M
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
, @6 J) P# t- B% IFBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。1 ?; I4 I0 l& ^; M3 }* i& z
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？
/ e. q) X; f/ t, ]" r. J9 s一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。4 o9 R$ M) z2 V# M  y- Y1 W* i
7 何时须更换培养基？+ }' g  d4 [  M8 H4 T7 p% C
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
, {7 t9 T2 t, f$ U- u* B0 V0 Y& a8 培养基中是否须添加抗生素？
0 @* u" j; Z* x, \! m 除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。1 x. S( S  R; O% [$ t1 l3 |
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？6 v6 S: o0 B7 A% \# ~
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。

xingyanchao

好雨知春

回复 细胞卡也 的帖子; p" K5 y1 _+ z2 k3 u

8 r" m0 u$ k) t" J( }3 f很好 学习了

大胖子阿哥

为了防止冻存管爆裂   我建议先放入-80度冰箱30分钟