关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

wcforever126

回复 wangweilie0418 的帖子, y+ o0 n. v3 E+ ~( _5 e
$ H5 S& S4 g* j! w
请问您用的FICOLL多少密度的
. y5 m2 [- v, c9 r$ l: c

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:13 K, u2 b# [/ F0 z8 ^' q

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1
- g2 U7 ^4 S2 `& s; w) `

琛儿326

回复 sunjianhua2000 的帖子2 f! Q* I, {6 b0 ]+ t$ N# H
' G9 n2 {: U4 `
我们实验室用以下比例$ w; z4 Y  l! q# \' o
pbs：骨髓液=1:3，. D2 g- S. s$ b! n2 b
骨髓稀释液：FICOLL=2:1
& C# e  Z; H0 E- j

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血. E- T! ?, Y' U
↓
) }$ A6 x$ j) T: `% _( hPBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。# ^, o4 V* Z- P! z9 z
↓% z* P1 K$ \0 Q1 l$ {" m
弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
( F8 I% |% i9 `1 v取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
. C  f- w; {5 O% }6 `7 a( E2500转∕分钟，20分钟$ A. ?* G" X% [& Q, i
↓" c( _  Z' M( c3 _$ t& o4 _
吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。1 I* t3 i5 s/ K* Q% v; H' U
↓
9 |. P7 q$ `4 f取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。
" `% Y  g- ]7 z6 y( F↓
' {/ i0 r6 S, V' C/ }重悬，培养。
( h7 J8 I+ a6 [* [, i8 R

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事