2012细胞治疗技术研讨会嘉宾演讲摘要

坤明

作者：霁茗 来源：生物谷
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7 e3 M# Y; V+ e, Y; B前言：2012细胞治疗技术研讨会将于2012年6月1日~2日在羊城广州召开。$ G2 B+ w) ]% d, ?) v, X# |
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细胞治疗作为一种新型的人类疾病治疗手段，它克服了临床常规治疗的局限性，为人类疾病的治疗打开了全新的思路，展示出广阔的应用前景。但是，细胞治疗是目前最复杂的生物疗法，有许多的技术难点尚未突破，特别是临床应用的有效性和安全性依然是目前关注和争论的焦点。
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7 L2 n/ C+ j- m& x6 m3 r' a6 A2 i此次研讨会贯彻基础研究与临床治疗密切结合的原则，将重点介绍细胞治疗领域的研究前沿及最新技术，如: 肿瘤的树突状细胞（DC）治疗、T细胞过继免疫治疗、干细胞移植治疗、基因修饰化细胞治疗、微囊化细胞移植治疗等。% l$ h, V8 {2 y/ ~

" m# R) M# P, e+ V此外，针对行业中缺乏操作标准规范，技术及产品质量控制等问题，会议将邀请相关专家就“细胞治疗安全，细胞制品质量控制，临床治疗规范化管理”等内容进行报告并展开讨论，以促进行业健康发展。! R/ n& `* r) H. ?; [! {. f3 ?

8 R( y2 y# J1 ?3 i8 |吴苏伟
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三类医疗技术评审解析4 L( [4 L3 N" `! \
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医疗技术管理办法及三类技术审核介绍及解析，医疗技术管理办法修定。& A, M6 P5 y2 [3 x0 v. m

$ G! @! b2 p# n; L" I6 |( V. p, b张叔人6 c: g' b0 ?/ T6 F; D4 M$ j& F
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学习新版《药品生产质量管理规范》强化体细胞治疗的质控6 P( }2 ?. K: K

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- s6 m/ m, n' N  L* t; K6 @6 G去年卫生部发布了97号令，有关新版《药品生产质量管理规范》(以下简称药品GMP)。它是历经5年修订、两次公开征求意见而完成的。新版药品GMP吸收了国际先进经验，结合我国国情，按照"软件硬件并重"的原则，贯彻质量风险管理和药品生产全过程管理的理念，更加注重科学性，强调指导性和可操作性，达到了与世界卫生组织药品GMP的一致性。- z! _7 a" P2 q
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体细胞的制备与新版《药品生产质量管理规范》或制药有什么关系？因为体外进行细胞培养（未经培养的血细胞、骨髓细胞不在内），就要使用培养基、细胞因子等，需要GMP净化间，需要有标准操作程序（SOP）和产品的质控，这些和制药没有本质上的区别。经过培养的细胞可能被活化、或改变性质和功能,因此，终产品需要证明其安全性和有效性。因此，学习药品GMP对于体细胞制剂的质控是十分必要的。* v1 F2 }5 _' e1 {8 `* f5 R5 {/ M

7 ^+ ~* e! e/ ~去年年底我国卫生部国家食品药品监督管理局发布了卫办科教涵1177号"关于开展干细胞临床研究和应用自查自纠工作的通知"。已叫停未经卫生部和SFDA批准的干细胞临床研究和应用。这也是我国开展体细胞临床研究的良好开端。体细胞的研究和应用仅仅是开始，问题较多，但其发展潜力很大，尤其在肿瘤，传染病，以及再生医学方面的应用前景广阔。相信我国的科技工作者和管理者携手，加速科学的体细胞临床研究，一定会造福于百姓，并走到国际的前列。- E+ m) n1 n9 e$ K2 _
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124951375

听说，参会很多人

yangxiao1989

挺好的 楼主辛苦了~

AprilLI

这样挺好的，谢谢！

menghy

很感谢，不错的资料！

ziyunfei1982

没有ppt么

坤明

杨建军, ]4 C( n8 [2 \

! ]1 b; g3 ~, N; e- G* |- tLow Complexity and High Efficient Method of Cell Expansion for Cell Therapy# d/ P5 Q; m6 ?! h( M. T/ i4 w' m
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2010年4月29日，FDA批准第一个自体细胞免疫治疗药物/方法PROVENGE? (Sipuleucel-T)，使细胞免疫治疗进入新的阶段。细胞治疗过程中扩增足量的病人专属细胞是一件比较令人头痛的事情。采用不锈钢罐进行细胞扩增，发酵罐清洗、消毒和验证工作相当繁琐，极易造成来源于不同病人细胞的交叉污染；采用静态透气袋进行细胞扩增，细胞生长密度低，需要20-50个透气袋进行同时培养，工作量大，成本高，易于造成污染。- o2 O2 H8 Z! m: l  H9 H; ?
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本研究开发了一个简单高效的T细胞扩增方法，T细胞在WAVE生物反应器内进行灌注培养，细胞密度可达约20 × 106 c/ml，细胞活力 > 95%。经过约10天时间，在一个5L的一次性灌注用细胞培养袋内细胞总数可扩增300倍，达到6 × 1010 个活细胞。该扩增方法的另一个优点是细胞培养结束后，可通过细胞培养袋内置的7?m浮漂过滤膜(Floating Filter)进行浓缩，根据临床所需T细胞总数和体积，将细胞培养物浓缩至合适密度。Floating Filter省却了传统方法在细胞收获时的离心、重悬过程，更加省时省力，且不易污染更为安全。
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（生物谷 Bioon.com）
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坤明

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7 h% W/ f9 G* J. B2 d6 x3 x牛新乐
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干细胞库村对冻存技术和产品的要求' x- B( X2 R3 W5 S

3 o+ |5 D# I; d$ A- Z$ H& L3 G演讲探讨了生物样本尤其是干细胞长期冷冻储存所适合的储藏温度、冷冻技术、以及相关产品（设备、耗材、试剂），并对目前干细胞冷冻保存中一些有待进一步完善的做法提出建议以及相应的产品解决方案。3 i* b6 K" o5 H5 I/ W0 t) }

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坤明

董小岩
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7 z, b% o- J- S+ O$ O细胞microRNA活性谱指纹在细胞身份识别中的应用% {' U6 [* w2 x5 w6 C" U
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高通量的miRNA活性谱检测方法的建立及应用于细胞身份的识别。建立了一种基于AAV（Adeno-associated virus）载体的高通量miRNA活性谱检测方法miRNA Asensor array。miRNA Asensor array由多种miRNA Asensor阵列包被于细胞培养板上制备而成。利用AAV病毒的反向感染技术可以方便地实现miRNA的活性谱检测。每个miRNA Asensor均包含miRNA活性检测单元和内参单元，且两个单元之间被绝缘子序列间隔，降低相互影响。利用microRNA抑制基因表达的原理，在分泌型荧光素酶基因Gluc（Gaussia luciferase）的3'UTR(Untranslated region)插入miRNA完全互补的靶序列，构成miRNA的活性检测元件单元。内参单元为Fluc基因表达框。Fluc表达水平用于指示miRNA Asensor的感染效率。用转导系数校正不同miRNA Asensors感染效率差异对Gluc表达水平的影响。用转导系数校正后的control Asensor（不携带miRNA靶序列，其余结构与miRNA Asensor完全相同）的Gluc表达水平与校正后的miRNA Asenspr的Gluc表达水平的比值来表示miRNA活性。以HEK293为例，通过检测其let7家族、miR17-92 cluster和miR221/222 cluster活性与表达水平的关系，验证了miRNA Asensor array方法的有效性。应用miRNA Asensor array检测了多种细胞（BHK21、Huh7/CD81、HepG2、C2C12、Vero、U937、K562、BEAS-2B、HelaS3、HEK293和HEK293T及其它多种细胞）的miRNA活性谱，发现了各相应细胞的miRNA活性谱指纹。进一步比较了HEK293和HEK293T的活性谱差异，发现SV40大T抗原在对293细胞进行基因修饰后，HEK293T活性谱指纹的变化（miR-21活性下降）。同时比较了TPA诱导前后K562活性谱指纹的变化。我们的实验结果显示，miRNA Asensor array是一种简单、快速和方便的高通量miRNA活性谱检测方法，其在细胞的身份鉴别中具有重要的应用前景，并可方便应用于药物靶标的高通量筛选研究。8 x  h+ N$ ^  i- S

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坤明

张晓英
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0 V: J1 d- K0 _3 X+ N- q0 \神经干细胞移植治疗帕金森病安全性和有效性初步探讨
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* p% e  ?" U# l: h5 d帕金森病(Parkinson's Disease, PD)是中老年常见的中枢神经系统变性疾病,主要表现为肌强直、运动迟缓、静止性震颤及姿势步态异常等。病理上表现为黑质致密部的多巴胺能神经元变性、缺失和路易小体形成。0 g* m! p6 E( l7 x9 K6 }
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经典的药物治疗和手术治疗也只是对症疗法,不能阻止患者中脑黑质多巴胺能神经元变性的进程,因此移植不失成为治疗帕金森病的有效方法之一。既往曾利用胚胎移植、肾上腺髓质嗜铬细胞移植、颈上交感神经节或PC12细胞移植[1]治疗帕金森病,但其效果均不理想。神经干细胞(Neural stem cell, NSC)是一种在特定条件下具有多向分化、自我复制及高度增殖能力的未分化或低分化细胞,是能够向特定的神经元或神经胶质细胞分化的细胞总称。神经干细胞表面的特异性标志包括巢蛋白和RC1抗原等,而巢蛋白是鉴别神经干细胞的主要标志。神经干细胞治疗帕金森病的潜在优势 就帕金森病本身而言主要是由于中脑多巴胺能神经元选择性的发生变性、坏死,其发病部位局限而明确,并且有成功而稳定的动物模型。就免疫排斥方面,由于血脑屏障的存在,使得淋巴细胞难以进入脑内,可避免异基因甚至异种神经干细胞移植导致的免疫排斥反应。8 g# h: @4 a" u' |7 Y6 U" s/ H1 S

# e0 D1 W8 _& I4 L7 C试验目的：8 L* A7 Y- w" M" F9 I( C% y

" I( s3 k& _0 ?1 u+ r2 Z研究原发帕金森病患者应用神经干细胞移植治疗的安全性。
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研究原发帕金森病患者应用神经干细胞移植治疗的有效性。& d6 J7 P# I! j' N
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试验设计：( L: N& n' {; `, m6 \/ k- {5 Y' N& v

+ O& z1 k3 U3 `; ]" o( E1 w3 f开放、平行、(前后)对照临床试验。8 V) d; U5 _' ^/ K; W& @% N2 P) t
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PD诊断标准：根据《2006原发性PD诊断标准》。, y. X7 g5 G! F+ S& [5 `

/ o% [- i% @5 r4 N/ R7 E2 p& N% e纳入标准：) k9 @- i4 W! S1 ?. x
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(1)原发性PD病人。
$ d8 ?% P3 {' I" i' \/ i6 P0 Y/ @# F) r4 A$ u6 K+ g# G. O
(2)年龄≥55岁。! E* p' k/ V& c0 F
0 Z7 l: B$ g- N. e# ^) m+ [
排除标准：
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1.严重心、肺、肾功能不全、血液病
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% J7 }! e+ _5 F/ i; j2.重症感染6 r/ p# a5 ], F1 W, T
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3.恶性肿瘤8 ?! P3 d8 [% v$ F
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4.帕金森综合征7 @' w- V# F# O

! y# b; Q$ p2 r  I* D5.操作部位不允许
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+ o1 J4 e# \! {% k2 U3 _本课题观察病例数87例。& `3 e/ C% u. {/ V6 j2 v' S( O

9 X  I! ]7 S. C: s' ]( K治疗方案
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4 x' T! b9 V. L+ w2 {( Y5 lA 神经干细胞移植前（或药物治疗）2 o- {5 Z7 ~: ?  z# d8 }

5 f" g. h3 I$ ]( C% h. @* QB 神经干细胞移植后1 u5 P0 Q& H% {& M5 G9 r% U
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神经干细胞5×106 或 2× 107+ 多能干细胞混悬液 50ml（含0.5 × 108多能干细胞）， 1次／周，共3次。/ V) k, r! D& |  w' F

4 q$ e/ l: X) K+ c有效性指标：临床表现：震颤、强直、步态、表情缓解。统一的帕金森病评定量表UPDRS、 PD修正Hoehn-Yahr，分级量表变化。/ K0 t. Q0 i$ @% f9 I. Z
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安全性指标：不良反应、血尿常规、肝功、肾功、心电、胸片、头部 MRI 、颈部血管超声（治疗前后）、致病性、致瘤性、严重不良反应（移植后1、3、6、12、24 月评价）。) c" b1 t1 d$ e3 c8 k0 N- }: G# W

* M  k" K$ O! T7 c观察3年。
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0 A8 d" O8 m$ d  k2 d: P# Q0 i, U结果：明显改善PD病人的运动障碍症状（尤其对震颤缓解明显），提高病人的生活能力，精神、行为和情绪得到改善。( s/ x2 W3 k8 [5 ^) L

: {. P) M4 F, T! _3 ]7 f本组病例，19例患者出现发热、头痛，对症处置1～2天，恢复正常。无1例发生严重不良反应，随访3年，无任何不适和后遗症。治疗前后血生化检查无异常改变。% H5 ~8 `/ I' M2 u

7 a( r6 v1 r3 m" v+ E0 B! t6 `4 x展望：. f+ Z) y4 N  e7 P) M3 |
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大样本多中心随机对照试验进一步验证疗效及相关影响因素。+ D; |/ l8 \# n9 T: H1 v3 `$ c5 C

3 H( U9 A4 {* \长期随访进一步评估神经干细胞移植治疗PD的有效性和安全性。! v: F; `/ n: H: J; Q# I8 N

* ?7 V5 l" R9 T6 b制定综合方案、探索干细胞移植最佳途径和最佳细胞数量、移植次数、疗程等。6 q: M3 w5 H2 n, q  B
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