求教DC细胞培养问题，非常感谢

神经干

1．采集外周血100ml0 y2 Z" d6 [& c: {
2．用淋巴细胞分离液分离后洗涤2次，细胞计数后，将分离得到的单个核细胞按照3*106/ml的无血清培养液重悬，将加入六孔板中于饱和湿度37 ℃、5.0% CO2静置2h后收获贴壁细胞；
7 F1 U4 p% h, |5 Y: x+ [9 q9 @3. 轻摇细胞瓶，将不贴壁的悬浮细胞吸掉。在六孔板中加入2ml含终浓度为100ng/ml GM-CSF，50ng/ml RhIL-4的DC细胞完全培养基。; l% }0 B/ d* E1 `- f0 p
4．第2，4，6天时对DC半量补液。第7天（24h）后加入终浓度为25ng/ml TNF-ɑ，促进DC成熟。
" ?: ^. W/ o5 G# k$ G5．第8天收集细胞。  . G8 ]) i/ o1 f$ V
  
8 A( ^4 H. c8 r- x6 z8 C以上是我培养DC细胞的流程，有几个细节想请教一下：1 细胞接种密度在多大比较好，之前2*106扩增不是非常好；2 接种时直接接在六孔板还是瓶子中比较好，对不同牌子的瓶子是否会影响细胞贴壁效果？3 后期补液时需不需要按照细胞密度重新离心后接种？还是直接补液比较好；4 因子的浓度合适吗。非常感谢                                                                                                                                                                                                                                                      

mengnancy

GT-T551培养基可以;1640需要添加10%血清;做实验研究可以选择用1640.

神经干

回复 mengnancy 的帖子+ C3 @' L0 P6 V4 c4 q3 \8 D
! q; e% i; O9 s/ P6 _
哦问一下培养基用GT551可以吗，还是1640

神经干

回复 mengnancy 的帖子3 q" n& B, c( N5 F$ |
, d1 A7 q9 [- F; f9 e0 P. _9 \- _
哇非常感谢

mengnancy

1.细胞培养密度4-5.
6 \3 C" m2 H0 P, ?2 t0 ^5 a5 k2.如果不是科研实验,我觉得用培养瓶培养容易收集,培养瓶用康宁的了.0 C; U& m/ z; h% d$ c! A
3.在培养瓶接种后2h,将悬浮细胞倒掉,将贴壁细胞用来培养DC.6 \% I% N7 u6 f  @
4.后期可适量补液,没有半量换液操作.% p7 q, X' `- {9 w
5.细胞因子国产和进口的活性有不同,如果是进口的细胞因子浓度足够大了,如果是国产的,因子浓度合适.

今世不回眸

个人意见，细胞接种密度到5.0以上，最少要4.0，你DC不添加抗原，很难成熟的。。