求教DC细胞培养问题，非常感谢

神经干

1．采集外周血100ml
) t# g3 s$ K6 ?' L% a2．用淋巴细胞分离液分离后洗涤2次，细胞计数后，将分离得到的单个核细胞按照3*106/ml的无血清培养液重悬，将加入六孔板中于饱和湿度37 ℃、5.0% CO2静置2h后收获贴壁细胞；
  F+ i, f7 D( ^! r1 j+ r3. 轻摇细胞瓶，将不贴壁的悬浮细胞吸掉。在六孔板中加入2ml含终浓度为100ng/ml GM-CSF，50ng/ml RhIL-4的DC细胞完全培养基。& z* F1 k! D' i+ m
4．第2，4，6天时对DC半量补液。第7天（24h）后加入终浓度为25ng/ml TNF-ɑ，促进DC成熟。5 c* h* z% w2 A: h. H1 \6 U
5．第8天收集细胞。  5 M, d0 R5 ~! A
  : ?4 J0 {( `, U, s' I
以上是我培养DC细胞的流程，有几个细节想请教一下：1 细胞接种密度在多大比较好，之前2*106扩增不是非常好；2 接种时直接接在六孔板还是瓶子中比较好，对不同牌子的瓶子是否会影响细胞贴壁效果？3 后期补液时需不需要按照细胞密度重新离心后接种？还是直接补液比较好；4 因子的浓度合适吗。非常感谢                                                                                                                                                                                                                                                      

今世不回眸

个人意见，细胞接种密度到5.0以上，最少要4.0，你DC不添加抗原，很难成熟的。。

mengnancy

1.细胞培养密度4-5.
& A- `8 u0 p. P% @. ~# S2.如果不是科研实验,我觉得用培养瓶培养容易收集,培养瓶用康宁的了.
! I. B3 z$ F8 W) w3 A/ K- j% m3.在培养瓶接种后2h,将悬浮细胞倒掉,将贴壁细胞用来培养DC.
3 g2 t% d$ Y9 H& J4.后期可适量补液,没有半量换液操作.
$ K) m0 t4 G- P; e2 K5.细胞因子国产和进口的活性有不同,如果是进口的细胞因子浓度足够大了,如果是国产的,因子浓度合适.

神经干

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9 H2 M2 K6 z! B- R
* {# R' J2 C, D# \& x; b哇非常感谢

神经干

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* n) W3 o8 ?/ \2 Z  J" G% h/ |8 H$ X: z# Q! D
哦问一下培养基用GT551可以吗，还是1640

mengnancy

GT-T551培养基可以;1640需要添加10%血清;做实验研究可以选择用1640.