求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

jc_484

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

孙帅帅

6 z" C4 P6 N! S, ?' I5 L$ [) e  @- m1 n, a' l$ P% N: g
  如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！  关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

不倒翁

回复 孙帅帅 的帖子
7 S  x& a, p/ {: H; ?% a( I
/ m/ x9 j8 g7 G4 c0 {. k6 @小鼠用EDTA？

fuyinsheng

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方
9 U4 J  z5 T/ [9 E培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）  `- J' c& U0 S# n" L, y
消化用0.25%胰酶消化4min

wbj1983

回复 jc_484 的帖子: [+ j. X0 h6 I
! }. |% K7 N5 X" ]! s: E, C
基础培养液：knockout DMEM
0 Q8 J# O, k! L" K! ?5 \$ _7 OFBS:20%2 o2 S# j0 m# t( v) H7 L
NEAA! k( \) X+ V# n
Glutamin/ W' p' ^1 i2 `8 y# e: n0 ?& C
b-巯基乙醇
# r' i5 x/ h) q8 `3 T8 tLIF:1000IU/ML
# y2 `5 N! A1 B  x
$ u/ X% n, B  j# ~1 b消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

孙帅帅

回复 不倒翁 的帖子* {- g3 e$ b+ {& U2 O% r* L

$ V! V8 e4 [# n8 r3 I看错了   还以为是人的HES呢

Serene

回复 jc_484 的帖子; _7 F# J0 J" Q# E8 b
7 [4 c& O6 K7 K- j
DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF
; N7 i: U7 i: w- d1 d这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF2 t2 Z! w% {* Q" Z$ L) [
0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，