求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

jc_484

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

孙帅帅

/ u5 P( x1 F, ?6 Y0 v# k; W

/ a# c7 y( a/ l/ p* C& g+ g6 k  如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！  关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

不倒翁

回复 孙帅帅 的帖子5 \/ N6 B" K, Y" ~# N4 m# w) v' T

/ P7 S. e1 F9 O# `! C6 |5 X小鼠用EDTA？

fuyinsheng

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方  a. u/ {1 M" T$ a6 F
培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）
, k5 T( O1 l+ T4 v9 J消化用0.25%胰酶消化4min

wbj1983

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5 h( A/ r3 ?; N% P/ @& o* U- b7 h0 W7 ?, L2 V
基础培养液：knockout DMEM0 D( Y0 {/ Q/ G4 [! C$ Y7 _
FBS:20%, s2 Z7 E& }# u: I
NEAA
6 U( T: u* e5 R! a6 g6 n! ?+ MGlutamin: b8 s7 G- @; r, E3 `' M
b-巯基乙醇9 X. H2 E1 |( N* `
LIF:1000IU/ML  h' w% ^/ Y5 ]3 {- C# ~

- A( [3 Q7 |2 d消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

孙帅帅

回复 不倒翁 的帖子3 t3 a$ ]2 W* Z( J
6 a2 U0 j( A1 w
看错了   还以为是人的HES呢

Serene

回复 jc_484 的帖子! a" o0 W5 n6 h. W
, y$ y. d. B1 k; Q! m1 G' w, e' t
DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF
4 l! D. b$ O  ^: ^$ h这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF
) @( @, c! r! n2 S1 w5 f0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，