求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

nyming2008

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& Z2 e& {+ Q0 S5 U+ p0 f0 j) u# ^
- {  R3 z+ V" _0 j( j* B' s& G. i麻烦你能给我说一下他的联系方式吗？我请教一下他，谢谢了！

nyming2008

回复 maiweiqian 的帖子' p! Q  r% f# E& T9 z2 p' c$ Z; R

  p2 Y6 i# {: K3 Z* P我是直接无血清培养

nyming2008

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( F' y& C! v  {" h) I/ @# D9 v4 G6 B7 P, k/ A6 P/ Q3 m. ?5 Y
请问你是用哪种酶消化的？消化多长时间？

青云之上

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* K& E% c0 @8 D; I
四型胶原酶，DNA酶，透明质酸酶，四个小时，有时候也四度过夜~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子3 p6 |1 I$ E8 ~1 l! l
! C) {2 G8 j5 M( D% M- j* W+ s
请问他是悬浮培养还是贴壁培养的？~~~

tiramisu

回复 青云之上 的帖子) U: [' d/ h5 Z

8 z/ e5 n( {% x. M+ y- Z2 ?她做的贴壁

tiramisu

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; l+ E3 j  I( m5 }6 C! O
4 m# u# A( c4 i1 Y我想问一下，你胶原酶与培养基的比例是多少？还有不加透明质酸酶有什么影响么？- l) m0 }4 ]9 d0 B

nyming2008

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! E' E* {6 b" t. \
  X' a/ F: X% w8 Y% Z各个酶的剂量是多少？你是37度4小时吗？

青云之上

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- x2 t, \0 t* w, l5 k
& x% ?% Y" b5 o9 R总共是10毫升的消化体系，按照说明书配好酶的储液浓度，具体用量看你消化的实际效果，我们是1毫升胶原酶，100微升透明质酸酶，50微升DNase，剩下的加培养基，37摄氏度水浴消化4小时，每20分钟振荡混匀一下~~~

nyming2008

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+ g2 X: y4 N8 F$ J6 O" e6 e; B2 t9 o$ f% b6 N- w, x( E7 F0 p+ s1 d, v
我跟你的这个消化方法及用量都一样，我有两次消化了4个小时，结果组织全消化了，而且不能用了。