无饲养层培养干细胞

flyjing

各位大虾，我马上要无饲养层培养小鼠胚胎干细胞，不确定培养基用什么，各位大虾有知道的吗或在培养的吗?不胜感激

defu

条件培养基

plainxie192

2i/LIF体系可以的。

孙帅帅

E8就行吧~~

michaelgibh

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' u2 k+ [  u' m( t5 Z
- P/ L, m1 L) I% @3 DE8不是用来养人得干细胞吗，养鼠的也可以？

碧螺春的秋天

N2B27 2i/lif

zm19900508

2i(50ml) avoid light
+ U5 t! \% A2 [1 wDMEM/F12                24ml& w, [) ?  _1 P& a2 @. i( n" p+ {* X
Neuronbasal                24ml
! V/ C0 o2 z0 |2 B5 d0 ML-glutamine                100*
: X3 Y! b& J; ~8 v; pNEAA                       100*8 W- e( P/ F: p- u
sodium pyruvate              100*6 S* j& O+ x& j/ P+ A, A
penicillin/streptomycin        200*
/ x( O! h' [$ q! ~, F1 [2-mercaptoethanol            92ul
+ |/ b4 l+ B8 {5 s9 @5 EN2                         250ul. u/ u! q6 l7 ~" \0 n
B27                         500ul
" u) k" Y4 ^$ a- iPD                           25ul, ~+ a, j3 \" @1 p
CHIR                         25ul
9 {9 g7 E: l4 n1000 units/ml lif               5ul
8 G* @, k3 g/ ]状态很好

sszxlijin

DMEM（高糖）
2 u' X# `# ]3 X6 b7 w6 s1 AFBS% A- o/ R0 `2 i2 ^- X; h
L-glutamine      
; c4 a5 q& J% O. [. r% SNEAA               
; k% z( J& f! @  Mpenicillin/streptomycin   , q* M$ d; U/ d" S& D
2-mercaptoethanol     8 E% `) I/ h5 a* ~. k& x6 D
1000 units/ml lif               9 d0 v, u5 E1 f5 ^' s  _( @) V- m6 |
养在明胶包被板上，我养的是E14和R1  效果挺好的

kasaya

再贡献一个3 e, W1 `/ x- P$ N+ F
ES medium                                        100 ml
& J) ]& E2 \& j& D% v& P  |DMEM (Specialty media, SLM-220-M) 80 ml % ~  B) n2 M. N+ B, L$ X
FBS (Hyclone, SH30071.03)              15 ml
" {+ F/ ]' E' y" Q4 N3 F! d9 TPen/Strep (100X, Specialty media, TMS-AB-2C) 1 ml （不加也行的，但是建系时要检测支原体）) d2 z) R& z) g0 }: O* \
L-glutamine (100X, Specialty media, TMS-002-C) 1 ml " c. L9 A, w# T% E1 ?9 Z- |
Nonessential amino acids (100X, Specialty media, TMS-001-C) 1 ml " d6 ^7 p, A, u! r/ \
Nucleosides for ES cells (100X, Specialty media, ES-008-D) 1 ml
( }2 u& y% W) w- V$ j; R" K2-mercaptoethanol (100X, Specialty media, ES-007-E) 1 ml
! l. ~4 T: [6 @' R. K% D! a) a6 \LIF (ESGRO, GIBCO 13275-029) 10 μl
9 @! T: S- |( Z0 [0 APD0325901 MEK inhibitor(10mM Stemgent, 04-0006)         10μl     (1μM)
: l+ ~& @" |- v2 j! G" [CHIR99021 GSK3βinhibitor(10mM Stemgent, 04-0004)         30μl     (3μM)
. R) `7 Z% B! M+ f7 P) B- X, j9 D6 \) b. W$ t' _
小鼠ES不用feeder也会长得很好的。如果不加2i也行，就是有些克隆容易分化。

flyjing

谢谢各位，我要分离小鼠原代胚胎干细胞，不用饲养层，分离出囊胚之后，该用什么方法得到胚胎干细胞呢，不胜感激