无饲养层培养干细胞

flyjing

各位大虾，我马上要无饲养层培养小鼠胚胎干细胞，不确定培养基用什么，各位大虾有知道的吗或在培养的吗?不胜感激

defu

条件培养基

plainxie192

2i/LIF体系可以的。

孙帅帅

E8就行吧~~

michaelgibh

回复 孙帅帅 的帖子7 s; L/ C; |! t) D5 T

$ V! C" Q0 Q7 r5 o3 r2 M8 p8 Z! TE8不是用来养人得干细胞吗，养鼠的也可以？

碧螺春的秋天

N2B27 2i/lif

zm19900508

2i(50ml) avoid light& E& C" K8 K+ ^. _# `. [5 n
DMEM/F12                24ml
% p1 p) ?/ A- r2 i5 `Neuronbasal                24ml* l- I( q& u! o$ `; r( y+ V8 ?, j+ m
L-glutamine                100*
9 \' H  R8 e0 h# ZNEAA                       100*
- p$ ^+ M. F0 fsodium pyruvate              100*
% `, t: |* Q" Xpenicillin/streptomycin        200*1 c, R! W2 j& m* O8 p7 S
2-mercaptoethanol            92ul4 f, Y9 \9 f; J# a! n( J* {: W
N2                         250ul2 B" ]7 q. G, A% _- N
B27                         500ul
% C: i) Y, G  GPD                           25ul
8 z2 N* a9 F' X$ T' |( X& ^CHIR                         25ul8 \9 m# R( N2 L
1000 units/ml lif               5ul
. L+ ]3 t+ h- f% ?状态很好

sszxlijin

DMEM（高糖）
- r: b4 ?" |4 y, I9 k# L) uFBS0 l/ B6 P$ _/ u9 h+ m
L-glutamine      % A: m# O* q2 n7 D& l% k
NEAA               
; o6 p$ }/ M1 Z2 d' X) {7 [penicillin/streptomycin   5 e$ B! ^" }) J( K9 ^
2-mercaptoethanol     & O7 L) g& n5 u5 A
1000 units/ml lif               / s1 ?6 W9 m* @9 r
养在明胶包被板上，我养的是E14和R1  效果挺好的

kasaya

再贡献一个
. e* p. S3 Q* u9 E* KES medium                                        100 ml + t1 M7 r9 I9 O8 D2 W# n8 ^( }
DMEM (Specialty media, SLM-220-M) 80 ml
4 y7 s! ~- n9 t3 J0 {) ?4 eFBS (Hyclone, SH30071.03)              15 ml
9 I2 }; |1 d% G+ h0 I, ZPen/Strep (100X, Specialty media, TMS-AB-2C) 1 ml （不加也行的，但是建系时要检测支原体）
( [. x/ x2 f; Z4 hL-glutamine (100X, Specialty media, TMS-002-C) 1 ml ; }9 o5 ~( t! C% ?
Nonessential amino acids (100X, Specialty media, TMS-001-C) 1 ml 0 C( z8 K( B% U
Nucleosides for ES cells (100X, Specialty media, ES-008-D) 1 ml
( l6 b, N# k: b# V8 m2-mercaptoethanol (100X, Specialty media, ES-007-E) 1 ml * y! L( r/ o1 {
LIF (ESGRO, GIBCO 13275-029) 10 μl
; L+ a$ r2 N  {, Y9 HPD0325901 MEK inhibitor(10mM Stemgent, 04-0006)         10μl     (1μM)
! V7 ~. U9 ?5 P9 G7 cCHIR99021 GSK3βinhibitor(10mM Stemgent, 04-0004)         30μl     (3μM)$ P% h) ?8 O0 R4 X/ @$ B9 J# g' x

  ^. y+ n) a! B7 ^6 K# l+ J小鼠ES不用feeder也会长得很好的。如果不加2i也行，就是有些克隆容易分化。

flyjing

谢谢各位，我要分离小鼠原代胚胎干细胞，不用饲养层，分离出囊胚之后，该用什么方法得到胚胎干细胞呢，不胜感激