原代悬浮细胞传代全死了

tiramisu

如题，之前长得还可以的原代悬浮培养一传代之后都没有了，大家的原代有没有这样的问题呢？我用的是离心法，是我的方法不对么？求教！

青云之上

你养的是什么细胞？
: y6 {' G! K* I/ G第一、有可能是细胞和培养体系本身的问题，我之前弄乳腺肿瘤干细胞的时候就这样，原代很好，一传代克隆球就很少；
' o$ }$ F& S% A/ p" c4 g1 S7 R第二、你离心的时候用多大转速？离完在离心管底部肯定是能看到沉淀的如果本身有细胞的话，你可以注意下；
# R$ X& Z& V4 S: A第三、如果细胞不是很多，且不易增殖，可以考虑不离心，直接一传二或者更多，然后补足培养基。

tiramisu

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# w/ j, L: m) W! e) P  I( ]+ P
我养的大肠癌原代，离心转速1000r，4min。离完感觉完全看不到沉淀。之前你也做得悬浮培养么？请教你怎么解决这个问题的？

tiramisu

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- Y) Z- D+ Y6 u: N- n; G
9 G$ @" l' ~. N  B6 ]7 C还想请教一下，你的培养基用的高糖还是低糖呢？

青云之上

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) ]+ y- c4 D- s. A( _6 P' W$ z, w7 {( D% @' J+ h
不应该啊，方法没有问题啊，你确认下看离心机有没有问题，你可以试试提高转速~~~

青云之上

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! l. Z( w! G) U+ q( X/ e) `4 s) Z7 X( r+ q, i1 D: V
高糖~~~

一滴清露lv

你好，看了你的帖子，你养的是原代悬浮干细胞球吗？想问问你一些问题：1，你的悬浮细胞中培养皿里面是否会存在很多杂质（如血细胞，凋亡的细胞碎片）的问题？该如何去掉或者避免产生这些杂质呢？2.悬浮细胞球长得好吗？我的原代培养的球数量微少，而且出现越长越少的问题？你知道这是什么原因吗？
3 }* c6 Y/ F6 K" s: V本人也是做的原代干细胞悬浮培养，因为处于摸索阶段，总是挫折满满，就想向你打听一下，希望能得到你的回复，谢谢！

细胞海洋

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! b. k9 |4 L. }) o7 D# T9 x" f# h  j# D8 m# u4 e) q4 U0 W/ X
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tiramisu

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8 K) }5 R% C& u; V; _1 u6 C6 W
我的情况跟你差不多，也是出于摸索阶段。杂质很多，有两种办法，第一就是不去管它，随着时间增长会自然死亡，或者在消化完组织后用低速离心的方法把其中较大的杂质去除，留上清再告诉离心得到细胞。我现在也很苦恼原代细胞数量的问题，跟老师讨论过之后还是觉得是消化的条件不对，决定多试几个条件。一起努力吧，希望日后可以多交流下经验。

一滴清露lv

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+ t0 G' a, q9 t" T7 {谢谢！好啊，多多互相交流，也许就能发现一些存在问题或解决方法！