原代悬浮细胞传代全死了

tiramisu

如题，之前长得还可以的原代悬浮培养一传代之后都没有了，大家的原代有没有这样的问题呢？我用的是离心法，是我的方法不对么？求教！

青云之上

你养的是什么细胞？
0 `2 b2 U& j) F第一、有可能是细胞和培养体系本身的问题，我之前弄乳腺肿瘤干细胞的时候就这样，原代很好，一传代克隆球就很少；6 ^0 }4 E! M& o) {
第二、你离心的时候用多大转速？离完在离心管底部肯定是能看到沉淀的如果本身有细胞的话，你可以注意下；
6 O5 F$ F% G6 W  V7 n- p- V第三、如果细胞不是很多，且不易增殖，可以考虑不离心，直接一传二或者更多，然后补足培养基。

tiramisu

回复 青云之上 的帖子8 a+ {, z4 G" P" P
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我养的大肠癌原代，离心转速1000r，4min。离完感觉完全看不到沉淀。之前你也做得悬浮培养么？请教你怎么解决这个问题的？

tiramisu

回复 青云之上 的帖子7 [0 L( b4 J" @) `& X, t' x* W

! ?! p) d/ u4 f& S' A2 g还想请教一下，你的培养基用的高糖还是低糖呢？

青云之上

回复 tiramisu 的帖子5 b' K5 S; \5 T1 w
8 a" w6 l! f! p6 S
不应该啊，方法没有问题啊，你确认下看离心机有没有问题，你可以试试提高转速~~~

青云之上

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. J. r% k# k/ }4 o' L3 u4 G7 ~7 _- j4 t. ~6 q, S+ }
高糖~~~

一滴清露lv

你好，看了你的帖子，你养的是原代悬浮干细胞球吗？想问问你一些问题：1，你的悬浮细胞中培养皿里面是否会存在很多杂质（如血细胞，凋亡的细胞碎片）的问题？该如何去掉或者避免产生这些杂质呢？2.悬浮细胞球长得好吗？我的原代培养的球数量微少，而且出现越长越少的问题？你知道这是什么原因吗？  {2 V1 W) J) k" W
本人也是做的原代干细胞悬浮培养，因为处于摸索阶段，总是挫折满满，就想向你打听一下，希望能得到你的回复，谢谢！

细胞海洋

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tiramisu

回复 一滴清露lv 的帖子
. K& O! z8 X6 c  ~; o, c
; N) r0 u: W5 ]5 C我的情况跟你差不多，也是出于摸索阶段。杂质很多，有两种办法，第一就是不去管它，随着时间增长会自然死亡，或者在消化完组织后用低速离心的方法把其中较大的杂质去除，留上清再告诉离心得到细胞。我现在也很苦恼原代细胞数量的问题，跟老师讨论过之后还是觉得是消化的条件不对，决定多试几个条件。一起努力吧，希望日后可以多交流下经验。

一滴清露lv

回复 tiramisu 的帖子! q2 \. L; _' k1 G
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谢谢！好啊，多多互相交流，也许就能发现一些存在问题或解决方法！