原代的脂肪间充质干细胞变成了脂肪细胞？？？

Cyclone2009

取得SD大鼠做了脂肪间充质干细胞的原代培养，现在是第7天。3 K  J0 K. q) i4 |3 z
今天用高倍镜看发现聚集在一起的细胞，尤其是中间部分，胞浆里面出现又圆又亮的小泡，像脂肪滴一样。。。$ I' n- W# [, N: X  k) X; s
我都没有动它，难道自己分化为脂肪细胞了？还是脂肪间充质没提出来，提出来的根本都是脂肪细胞呢？  f7 N; U1 f7 S0 D. i
请有经验的战友指点呀   培养液是DMEM+10%FBS
' w& @/ ?1 }; Y2 U! m2 f$ R# G上图：：& b( C2 b& m: ^: o1 n# R& _

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6 E# O) F. P# l1 E, F' X2 [& b1 N
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Cyclone2009

还有，我怎么感觉细胞这么脏呢？中间黑色的颗粒是什么呀？？

lgs1

回复 Cyclone2009 的帖子! d5 s6 ~6 J" u: t- Q1 I$ {

  X2 }" h. K; x7 `0 |% r  Q你可以用油红O染一下看是不是脂滴

s02260441

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$ w, ]1 j& K( ^/ E5 Q8 F0 p" G. e( F8 L. m! ^
建议可用oil red染色看看。" v! G/ t$ _, {, x- ]

4 a2 D3 e9 z. H) T不过正常的SVF分离步骤应该不会有太多的脂肪或油滴进入培养盘中才对，可以请您概述一下操作方式吗？

Cyclone2009

回复 s02260441 的帖子  Q$ V. a" i6 C* q" T0 U" f2 o
" _7 ?& g0 C4 ]
是呀，根据文献和论坛里的经验贴提取的SVF.6 d" d2 h0 |: o) G
大致的步骤是：
/ u' Y3 ~: C4 ^" f3 {; @SD大鼠200g左右，断颈处死后酒精浸泡5分钟，取腹股沟脂肪组织，剔除血管和筋膜，剪刀剪碎，加0.1%胶原酶，37摄氏度摇床60min消化。之后加入培养液中和，反复吹打，300g离心5分钟，去除上层漂浮的脂肪组织和上清液。沉淀再次用培养液悬浮，离心300g 5min，小心吸出上层的油脂。最后取沉淀悬浮接种。。
* a  R# Y! X& M我没有用到滤网和红细胞裂解液。。

wf78365421

不是脂滴，应该是细胞老化的空泡。你可以用油红O染色鉴定下。. \% g( t, \( z# W; t/ B

chenlin080102

用染色方法先确定一下是否是脂肪细胞

s02260441

回复 Cyclone2009 的帖子" s1 p* j9 c: w0 E4 I+ ]
# a$ s* x6 ]/ W0 Q8 D" ^4 D; e: z/ Z
操作步骤应该没有什麽问题。
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那就试着用Oil red染色吧！$ h% Q$ w$ o* N3 C" \4 `
# _* s" y" Q3 B! N6 j6 m; c4 Q
另，也可以试着传代再继续培养看看。

baicaikua

我觉得是间充质老化，消化过度了吧

baicaikua

我觉得是间充质老化，消化过度了吧