原代的脂肪间充质干细胞变成了脂肪细胞？？？

Cyclone2009

取得SD大鼠做了脂肪间充质干细胞的原代培养，现在是第7天。3 k. u. e9 {; ^, `' E* U
今天用高倍镜看发现聚集在一起的细胞，尤其是中间部分，胞浆里面出现又圆又亮的小泡，像脂肪滴一样。。。
: ?. ?5 F7 T/ G, y1 O) V' K/ e我都没有动它，难道自己分化为脂肪细胞了？还是脂肪间充质没提出来，提出来的根本都是脂肪细胞呢？
' @( [' i' w  B& k% \请有经验的战友指点呀   培养液是DMEM+10%FBS4 R% k  D' M! l2 _) O1 F% |# y; |
上图：：- V6 B4 n9 o; `5 j: u
% g9 Y+ I+ x8 N4 v% K
3 I# e& W, p8 D
; r9 M% q3 \1 F, J( E. n4 r

. H# p: r* Y9 U( Q2 x3 v) N* S

Cyclone2009

还有，我怎么感觉细胞这么脏呢？中间黑色的颗粒是什么呀？？

lgs1

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8 _+ z: @2 C' ?& f) t3 ]! s
# d' \$ [5 ~  j  W) k- C你可以用油红O染一下看是不是脂滴

s02260441

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7 U! e7 V9 f! j  t" p) Z* B* o
, K$ f  k4 X$ A3 w! H) V建议可用oil red染色看看。( k0 X1 N7 j+ O6 ~3 }* R

# h. b* V% Y- |. E8 d$ i不过正常的SVF分离步骤应该不会有太多的脂肪或油滴进入培养盘中才对，可以请您概述一下操作方式吗？

Cyclone2009

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# H' C% ]- ~( t+ H8 B# b9 b) d7 ?2 v/ _  ^2 J
是呀，根据文献和论坛里的经验贴提取的SVF.' r+ q. y* {/ i, K+ ?+ V' ]: @
大致的步骤是：
5 m& I4 n5 t" A& b# f$ NSD大鼠200g左右，断颈处死后酒精浸泡5分钟，取腹股沟脂肪组织，剔除血管和筋膜，剪刀剪碎，加0.1%胶原酶，37摄氏度摇床60min消化。之后加入培养液中和，反复吹打，300g离心5分钟，去除上层漂浮的脂肪组织和上清液。沉淀再次用培养液悬浮，离心300g 5min，小心吸出上层的油脂。最后取沉淀悬浮接种。。. F3 C9 D2 M; X: k
我没有用到滤网和红细胞裂解液。。

wf78365421

不是脂滴，应该是细胞老化的空泡。你可以用油红O染色鉴定下。3 T* h3 t& M& q: Z

chenlin080102

用染色方法先确定一下是否是脂肪细胞

s02260441

回复 Cyclone2009 的帖子4 T0 X. F* {4 }) E% ?
$ B5 B  K6 k) W0 H" s
操作步骤应该没有什麽问题。
( K2 J1 l0 z6 c; J( p: l+ }& j: g+ X8 G
那就试着用Oil red染色吧！
5 |  N% t4 j5 u6 g: o" D
7 M5 {1 R) Q+ B, m. {9 r, T0 ]另，也可以试着传代再继续培养看看。

baicaikua

我觉得是间充质老化，消化过度了吧

baicaikua

我觉得是间充质老化，消化过度了吧