求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
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问题如下：* z$ S* p5 N7 v
     1 EB逐渐脱落散开的原因？
% V5 @: d- X7 G6 E     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？# ~4 A! X0 g( {' S* T2 v
   ! j: O8 q9 P2 U, w
                   谢谢！

bio-bin

回复 ligangtiancai 的帖子5 H  O" }& s+ V8 U

( ?9 K) n- J8 V9 \: V我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

回复 bio-bin 的帖子' P* g5 m+ ~7 t. R
/ P1 Q) K, W0 r+ F
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
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/ t" z9 k* P6 t4 g7 U另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

回复 jefferson 的帖子. p+ y  P( U  w. A
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恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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3 v1 [! a% u0 E6 h) HGIBCO

echoxy1020

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请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。