求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
( S6 _9 r4 \+ _! o7 v* ?
9 Z. u! T  x' O; D5 s问题如下：2 c! V/ k, d, n1 K
     1 EB逐渐脱落散开的原因？
8 I4 j, k, }; t1 m     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？, j4 i" d- o5 s" w, P) }
   4 D5 x" g* ^' P! W
                   谢谢！

bio-bin

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0 m. w% T! @" z& _* o
; [0 Y1 I& l7 H) k: ^我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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- b# {5 f8 F# T& u+ {
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
6 o/ g8 ]% n9 Q- x7 h  ~
. t8 T# I' d# G/ W另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

回复 jefferson 的帖子# n$ s5 O7 v4 Z/ k" h* X
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恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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! k9 k- z+ f6 _! K# d
# [% [  D2 h/ T+ E% BGIBCO

echoxy1020

回复 jefferson 的帖子  E' H' b5 G7 }
5 [# R- [# i" ^7 a0 F  g9 Q
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。