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Wharton胶组织的消化:
9 l; V, s; u# c Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
1 d& ~5 d: e( k7 }小烧杯中,置于37度恒温培养箱中消化16—18h。
& Q+ i8 _" H( z1 q) {3 g; i 加入适当体积的PBSA(PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白,即BSA),一般是
+ Q& i% p& M1 s. X! o) L胶原酶溶液体积的2倍,250g离心5分钟。
+ E3 t! Y! E) P" `0 n; e" b 弃上清液,加入2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍),37度处理30
0 J0 X6 x: R2 E( G2 f分钟,
' ~$ c) G) D C# w 加入适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止消化。2 ]: h) d0 Y" L1 G1 y
1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.- g! O& r! E) S6 u d. S# }
用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少8 y# A7 j$ r1 g+ y1 @. q
许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在- u3 h( e A8 z6 S
1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
3 \0 ^5 l1 }: _# {" I9 U效果的话,还行吧,就是细胞出来的块,不过处理过多,对细胞影响较大,不是时间赶的话最好采用贴壁法8 e1 s+ J/ n& G) X' ?
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