酶消化法 分离培养间充质！

帝国黑骑士

我用组织贴壁法，养间充质，想知道，酶消化法都怎么做的，效果如何！

xiaopingzeng318

1、准备好胰蛋白酶，浓度0.25%或0.125%均可；
" v. Z" T& I( t2、胰酶消化细胞：弃去培养液，用生理盐水洗涤一次，加入适量胰酶消化。
8 K; Z1 |$ j) R0 C9 k% V/ D) T. L3、消化时间要自己摸索下，室温2-5分钟，中途可在镜下观察，大部分细胞变圆一半左右细胞漂浮时，既可终止，过久会使细胞损伤死亡等。用DMEM或者生理盐水终止消化，用管吹打瓶或皿，收集消化液，再用生理盐水洗涤一次收到剩余细胞。
) h! D7 V. Q: b$ D- R4、将消化液离心，一般1000rmp离心10min。
% `- w! r7 ^2 ^: N8 O6 J4、离心后弃上清，加入原培养液重悬，吹匀，取10ul细胞进行细胞计数，继续传代或者其他实验

owenlion

你用什么组织做酶消化

owenlion

回复 xiaopingzeng318 的帖子) {" o6 n( _9 `( P* ^

( U8 ~. v* \, E9 w" N应该针对不同组织选择不同的酶吧

帝国黑骑士

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/ w+ V  F1 k; j; E& u
; Y4 a0 p, u8 d: n; R1 _脐带间充质组织！

单个核细胞

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% f0 X$ Z- t0 B5 i1 H
5 W8 A( C; L( l( C* k# }* {# O论坛里搜一搜。
$ Q; C: F* ^* O& f/ Thttp://www.stemcell8.cn/search.p ... mp;searchsubmit=yes

xiaopingzeng318

回复 帝国黑骑士 的帖子1 A! H& M) t3 m7 M( N

" C. t; r* o' u2 h1 M脐带间充质可以用胰酶消化

xiaopingzeng318

不好意思，没说的很明白，原代的话用组织块培养，结果不错，没有用过酶，我说的酶是指后面传代的

owenlion

这个评分的不专业

owenlion

回复 帝国黑骑士 的帖子" v, \, k' o3 f3 S) M

. r) c, a9 L& [酶消化有点难度，还是不做的好，组织块养的细胞还好点