酶消化法 分离培养间充质！

liluli0715

我们用二型胶原酶消化过脐带，根据脐带的长短及大小消化时间不一样，酶消化就是过滤有点麻烦，消化后细胞1-2就可贴壁，比组织贴壁快

细胞海洋

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+ J# z. ~, L$ I" l; C的确 可以说是相当不专业 主要是因为很多版主都很忙 所以绝大多数评分工作由我来完成。还望你原谅和理解。

nek314

方法其实有很多，用几型胶原酶的都有，还有的是试剂公司自己的试剂盒，胶原酶分的会比较好，就是成本贵一些，细胞也比较杂，需要慢慢清除

zhj1988

请问1000rpm 10min对细胞损伤不会很大吗，求解，大家一般用多少啊？

细胞海洋

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2 P! \0 A6 Q  m6 U0 T2 z! r3 M
6 o" a) X$ v" E& {建议你发新帖提问

细胞干

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7 \7 W  A1 A  B$ {
5 r+ T0 M* O1 O* u* ~; _看你什么时候离心了，如果是酶消化法原代培养的话，可以用梯度离心法，2500rpm 15分钟，弃上清后稀释 1500rpm 15min，弃上清稀释 800rpm 10min；如果是传代可以用1000rpm 10min

yingjie

Wharton胶组织的消化：
8 B# c& K5 `: G' n% E& h$ ^    Wharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
0 r' y8 C+ e6 B4 i2 l6 f7 s: u小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化16—18h。
+ I1 f2 v0 R  U. V3 K    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是
2 D$ A) H+ w( G) D5 Q& V% T7 c胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。1 S: W2 G! v7 `& N2 t
    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理304 }0 U4 P% Z8 x2 w; R
分钟，$ T* O1 ^; p4 B5 R1 G
    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。
5 k: ~* U) p$ r6 x8 G    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.
+ a, p1 V$ E2 ~: B    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
4 Y+ [5 \2 t* v3 q  H5 O许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在
2 z' r: u' g0 l1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
3 T, C; i3 N7 _5 A6 ?! d1 O# p效果的话,还行吧,就是细胞出来的块,不过处理过多,对细胞影响较大,不是时间赶的话最好采用贴壁法
& h2 N+ A! ^! c- ^) t2 c

lyj-0017

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( U' X9 s+ f  I0 v: I( ~/ G
7 c1 N( N7 R! y% s可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

lyj-0017

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4 U3 h" O' ^$ ?8 {0 V$ q9 A
7 i; x2 r) a1 q# C! C' f0 F$ U可否将你的酶消化方法分享学习一下？谢谢

yanxm920

酶消化法会影响细胞的活力，建议用组织块法，获得的细胞活力和表型都非常好！