欢迎培养MEF细胞的同仁们进来分享一下培养经验

huozhicb

过两天我再养，给你算算

mbjane

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# z1 Z8 J( z# B9 R; e# \, U1 e# P1 q  m( n
非常感谢您的回复。根具最近的实验数据，我也感觉原代铺板适宜密度与您的经验（8个小鼠可以铺到6个10cm dish）相似。
( Q# @% S0 Y2 P1 U说到传代，我只发现细胞形态逐渐变大，立体感越来越差，没有发现变得小小的？这是什么原因呢？

igdb

消化15分钟太长了吧，我一般都消化5分钟，两次。绝大部分组织都能被消化成单细胞的。。

happygrass333

回复 mbjane 的帖子7 N8 L4 @( I1 c; @9 x5 N
- P$ b! R' v4 i0 z* f& J
MEF是单层的，本来就没有立体感。比较好的状态是刚铺下去的时候大概2小时你观察它呈圆形，有突起，有的看起来跟太阳一样中间一个核整个细胞铺得非常的开，但是第二天可以发现细胞进一步伸展变细。后面营养要是不好了，会细细的变成丝。你说的情况是不是因为小鼠的种类不同造成的，我们是昆明白。

mbjane

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5 D( y% D6 \: Q% k9 v9 k! H0 p# B6 K
我们用的是近交系BALB/C

mbjane

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" ]% ]; E% ]; V$ t! `5 @) K6 Q+ P9 s
5分钟就可以了吗?胰酶浓度多少啊？
* s0 O1 Q8 M1 r/ k

happygrass333

回复 mbjane 的帖子4 t* W3 Y) V3 d" D$ B# n; u' P6 B

  }5 J/ A  t. t' L# R" @+ \/ ~我们只用过一次c57，不好，又回归了昆明。

igdb

回复 mbjane 的帖子: f! U- u8 x$ w0 a

8 K  j3 x; d2 K0.25%

jhu132llh

1.PH是7.2；
  z; e  C0 ^- _8 K; z2.接种密度为一、二只/皿；胚胎要去头，去四肢，去内脏；! ]- ~* V7 g: n
3.MEF在三代内使用，不要传出三代，细胞状态不好；
' j/ r9 t# {8 [7 p, S, ^: Q4.MEF状态的简单评价：增殖效率和细胞形态：要求细胞增殖快的状态好，要求为典型的成纤维细胞特征的好，要求细胞结构清楚无大脂滴泡无大黑点为好；; S, j! G8 R) J7 Z# |- f0 y% H+ q
5.原代一般长至80-85%时传代，一般是原代2-3天就能传代，传代培养一般是2天左右传代；
/ Y" c! p1 I7 Z8 n- d+ d2 |6.孕鼠主要通过检栓来了解准确怀孕时间，检栓是为第0.5天；
1 T6 \& c6 K. ]0 l

bubble_w

回复 mbjane 的帖子* |. j( e0 D5 N3 l6 [' i7 n
( g  i" u# z: b! ]+ H0 r# O
1.原代培养一般2天即可传代，最多也不过三天。如果超过三天还没有达到传代的标志建议楼主再做新的原代。
1 a+ D/ r/ E  Y$ u+ j  Q2.孕鼠的状态我们一般不做太多的评估，主要是饲养条件要清洁级，而且尽量选择每年的四月至六月以及九月至十一月去配老鼠，这时段效果比较好。还有一定要去除寄生虫，每个月对鼠房进行熏蒸，老鼠喝的水最好高压一下。如果能做到以上这些一般都木有什么问题了。小鼠的品系最好选择B6D2F1，ICR也可，昆明小鼠最好就别用了。) i  l% k" Q: A1 y# S' g7 A; C
3.尽量去除MEF以外的细胞，主要是操作过程中多剪掉一些，不要舍不得。胰酶消化的时间要短一些，尽量使用剪刀将组织剪碎一些。: [4 m' m0 j4 @$ D# O
4.不知是我上次回复的不清楚还是如何，我的意思是尽量留一些小块的组织块，会爬出很多细胞，而且细胞生命力很强，状态较好。有时我在传代至第二代时仍有少量的组织小块，非常小，细胞状态极好，基本是每天都要传代，传代比例是1：3.
# A! M, f: s& H0 k( z* L( _: Q( c5.我不知道你的皿的多大的，我一般是大皿（100mm）8-9×106/皿。
; M0 I! _8 j7 L5 F0 {9 G! y. S- p