绵羊脐带间充质干细胞，无文献摸索-Ⅱ 细胞诱导分化鉴定 - 间充质干细胞专区干细胞之家



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楼主: 皮搋子	go 绵羊脐带间充质干细胞，无文献摸索-Ⅱ 细胞诱导分化鉴定 [复制链接]

皮搋子

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11楼

发表于 2011-2-20 11:07 |只看该作者

本帖最后由皮搋子于 2011-2-20 11:13 编辑 2 }+ `7 U7 p  g/ R
7 C9 F8 O. y9 U" ?  x$ o4 V7 Q! N/ O
转载一下noodleaf在一个帖子中的建议，供大家参考：另外也问一下noodleaf，你那个配液方法貌似很难理解。。。请问配液是多少D/F12加上1nM 地塞米松. B以及其他的？看的人相当无解啊，本来非常详细的一个技术贴，因为这个原因，根本没法用。

向成骨细胞诱导分化
成骨细胞诱导液： % z1 q: ~& v' m4 m! d* V( E( O
D/F12( 10%FBS)8 T# n; J( [+ V/ h; k
1nM 地塞米松. B
50 mM 维生素C* X$ B- P7 m6 c- c
10mM 甘油磷酸钠
每3-4d换液1次，诱导至21d检测。) s) y$ H+ L3 u" I, i( B
2.       检测方法; ^" o2 V5 v8 h* i5 b) F5 w! ?
1)       光镜下观察：可见黑色不透明区域，肉眼可见白色结节时，进行染色检查；
2)       茜素红染色检测：染色2-3min。- {9 I0 g' d9 U8 `( q
3)       成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）钙钴法染色：
3.       配液：9 J3 H; ]9 n6 {* ?% y1 y" ^
1)       1uM 地塞米松
2)       50 mM 维生素C9 P) ^+ P) ?% e# }
3)       10mM 甘油磷酸钠- ]6 `+ Y' x/ P) E) ]( H
4)       2%茜素红：取2g茜素红，溶于100ml95%乙醇溶液中，搅拌，与900ml 1% 氢氧化钾溶液相混。

向脂肪细胞诱导分化
脂肪细胞诱导液： 9 \% b% f- J2 M
D/F12( 10%FBS)
1uM 地塞米松6 e' v0 h" ]( V6 @
0.5mM  IBMX（3-异丁基-1-甲基黄嘌呤）7 Q3 L7 t8 y) g7 l
100ug/ml 消炎痛
10ug/ml 胰岛素
每3-4d换液1次，诱导至14d检测。
2.       检测方法：
1)       光镜下观察：有成串的脂滴形成后（约10d），进行染色检查；
2)       油红O染色检测：染色30min。
3.       配液：
1)       0.5uM  IBMX：
2)       100ug/ml 消炎痛：
3)       10ug/ml 胰岛素：) X7 K( o  Q( h4 o
4)       油红O：油红干粉0.5g，溶于100ml异丙醇中，使用前以油红贮存液：去离子水＝3:2的比例稀释成工作液使用。' c9 E1 H+ J# H

向软骨细胞诱导分化
软骨细胞诱导液：
D/F12( 5%FBS)
10 ng/ml TGF-β1
0.1uM 地塞米松
50 mg 维生素C7 \7 a% S2 ^3 Z, `0 v/ {) [
同时以未诱导MSCs作为对照。培养箱内进行培养，每3-4d 换液一次。诱导至21d后，进行相应检测。, P7 ~( i8 G; `* `& J6 o# V0 y
2.       组织化学和免疫组织化学分析)
1)       显微镜观察：在倒置显微镜下，MSCs成软骨诱导分化后，细胞胞体变圆，胞质减少。
2)       番红O染色：诱导分化14d后，移出培养基，生理盐水/PBS洗12孔板一次，4%多聚甲醛固定30min，PBS洗2次，1%番红O染色约3min，蒸馏水洗3次，95%乙醇洗3遍，光学显微镜下观察并采集图像。; \# u6 i" Z5 N/ ~5 j4 D! ~$ H# K( Y
3)       甲苯胺兰染色：染色2-4h。
4)       阿利辛兰染色：染色
5)       Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：) h/ {) O0 X( ?; G6 H" A! P9 G
3.  配液（1L）+ X) K( D  Q& n5 z: ?
1)  0.1uM 地塞米松：3.9*10-5g
2)  50 uM 维生素C：8.8*10-3g6 t) S5 r) t; Z7 |5 k$ d# z7 @
3)  10 ng/ml TGF-β1：10ug/L
4)  番红O配方：番红O  0.5g  95%酒精  50ml。0 A/ r% v% Z7 L, r$ g  J! c! V
5)  甲苯胺兰配方：甲苯胺兰 0.5g 0.1M PBS  50ml，调节pH7.2-7.4。
6)  阿新蓝染液(PH2.5)：阿新蓝(8G×)1.0g、3%醋酸100ml。调整ph为2.5。