间充干流式

花饶然

请教大侠们，最近两个月做了比较多种类的MSC流式表型检测，细胞都是培养过好几代的了，CD105总是不稳定，最低的时候都低于10%，最高的时候也有99%的，是细胞本身的问题？操作都是一致的。另外追问下，各位有没有发现细胞冻存过后，表面抗原会丢失的，我觉得下降一点是正常的，但是有的从强阳变为弱阳就太奇怪了

baby00000003

经验上传代特别频繁的CD105低。+ a) u! i. D. s5 M/ L. v/ H
至于冻存过后，一般没有立刻用来FACS的吧，好歹贴壁个48h再测？
1 `, H) s, R0 U8 C个人经历：延长孵育时间，比例会高一点～

花饶然

回复 baby00000003 的帖子1 }( p0 ]) q5 s  o, V+ F  C( n
7 x. n, Z- U" X7 x& ^
感谢赐教！我们冻存过的有复苏后立即做的，也有培养了再做的，都挺低的。您是说的代次高，还是指传代间隔短 的，我们一直都是差不多的，细胞增殖情况快慢悬殊到也不大
% c  c2 l% c% t; W! ~! a

baby00000003

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# \, `0 U, S0 h7 B
: p5 z* i0 u& }& @9 x表用“您”，伦家会不好意思. o8 m, T  m/ o, O
偶说的是传代间隔短，比如3天传一次的可能CD105低，5天传一次的可能好点～0 Y; W7 c/ u- y' x
不过低说的是不足95%哈，90%还是有的～

花饶然

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  V) H. M  T. n* u( v" a+ C* N/ q! r& ~1 O7 w' w
但是我说的低是跌到50%以下了，好奇怪的说，传代间隔我到还真没关注，谢谢交流。。。
4 H: |7 r; M% j8 n, ^- Y) P“您”是尊称，不表示年龄哈
+ A  f0 U1 n) h

wzs1985

你是用什么培养方法？以及用什么冻存试剂？+ \9 t$ ]3 _1 b4 z) W" b

花饶然

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9 r' h  W3 w" `, Q  U
7 X0 W# H, d+ y冻存液就是完全培养基和10%DMSO，几年来都这样

Ivan0108

10%，是不是抗体孵育出现过程中有问题？一般都不会出现这样的啊

花饶然

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( S: i( J( b% @/ V7 Z2 E9 y6 d! |8 ~. X- `% B0 M9 y3 R
木有什么问题呢，我流式虽然做的不多，但这几年都会做一些，应该是木有特殊的* [" G- ]% b4 e8 G& c/ M( X

wzs1985

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- E! V! l8 z! V4 _- @# L" z0 n/ _有没有考虑过，现在的血清质量下降了？   你用90%血清加10%DMSO试一试？