间充干流式

花饶然

请教大侠们，最近两个月做了比较多种类的MSC流式表型检测，细胞都是培养过好几代的了，CD105总是不稳定，最低的时候都低于10%，最高的时候也有99%的，是细胞本身的问题？操作都是一致的。另外追问下，各位有没有发现细胞冻存过后，表面抗原会丢失的，我觉得下降一点是正常的，但是有的从强阳变为弱阳就太奇怪了

baby00000003

经验上传代特别频繁的CD105低。8 a' p7 L( e1 C7 n
至于冻存过后，一般没有立刻用来FACS的吧，好歹贴壁个48h再测？
5 X# h" P9 y) P0 F- {6 }4 k个人经历：延长孵育时间，比例会高一点～

花饶然

回复 baby00000003 的帖子: f9 e- D  n' L* m

7 N! F  V) E1 `; o) v5 x感谢赐教！我们冻存过的有复苏后立即做的，也有培养了再做的，都挺低的。您是说的代次高，还是指传代间隔短 的，我们一直都是差不多的，细胞增殖情况快慢悬殊到也不大# o- |/ k" {1 r* }* t" `2 J% z

baby00000003

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0 \9 E$ d4 @6 |, L% z+ m表用“您”，伦家会不好意思- V) `, E2 S, ]& k. ], X# l' c
偶说的是传代间隔短，比如3天传一次的可能CD105低，5天传一次的可能好点～
2 s6 c5 a) }% l/ l  T- _: x& |1 z8 ~不过低说的是不足95%哈，90%还是有的～

花饶然

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# A) ^1 [2 r- }! m3 V; A7 l' X$ |9 }% H/ G7 b  b& Z
但是我说的低是跌到50%以下了，好奇怪的说，传代间隔我到还真没关注，谢谢交流。。。0 P2 J* A6 v5 p; L$ ^8 U2 }3 g
“您”是尊称，不表示年龄哈
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wzs1985

你是用什么培养方法？以及用什么冻存试剂？
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花饶然

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" T" b/ j! s5 c& a冻存液就是完全培养基和10%DMSO，几年来都这样

Ivan0108

10%，是不是抗体孵育出现过程中有问题？一般都不会出现这样的啊

花饶然

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: R1 \1 M2 a0 d6 g. t木有什么问题呢，我流式虽然做的不多，但这几年都会做一些，应该是木有特殊的
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wzs1985

回复 花饶然 的帖子* D+ G8 b- Y( O- x! [' @; s% h

: S9 i4 B( F7 Y) G) Q4 k) c) d% o有没有考虑过，现在的血清质量下降了？   你用90%血清加10%DMSO试一试？