间充干流式

花饶然

请教大侠们，最近两个月做了比较多种类的MSC流式表型检测，细胞都是培养过好几代的了，CD105总是不稳定，最低的时候都低于10%，最高的时候也有99%的，是细胞本身的问题？操作都是一致的。另外追问下，各位有没有发现细胞冻存过后，表面抗原会丢失的，我觉得下降一点是正常的，但是有的从强阳变为弱阳就太奇怪了

baby00000003

经验上传代特别频繁的CD105低。
$ ]8 y" Y( |' ^+ a4 R+ u至于冻存过后，一般没有立刻用来FACS的吧，好歹贴壁个48h再测？
5 J- N: h- ]/ q0 \5 P  F个人经历：延长孵育时间，比例会高一点～

花饶然

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4 ?7 @7 e) b$ [8 h. L6 Z4 E: C2 M" _% L
感谢赐教！我们冻存过的有复苏后立即做的，也有培养了再做的，都挺低的。您是说的代次高，还是指传代间隔短 的，我们一直都是差不多的，细胞增殖情况快慢悬殊到也不大
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baby00000003

回复 花饶然 的帖子) v4 b. @1 R3 d. \4 R7 T. X
; l& _1 |0 y  W$ P1 ?. E5 _0 o
表用“您”，伦家会不好意思, U! y$ v3 x; ]5 N$ c( t9 m
偶说的是传代间隔短，比如3天传一次的可能CD105低，5天传一次的可能好点～0 B; n) B# A2 Y" F2 g8 f9 o2 v6 @
不过低说的是不足95%哈，90%还是有的～

花饶然

回复 baby00000003 的帖子  F3 Z, O6 N6 ^$ y. ^5 n
: V4 y' J" L  B3 k. N# ~9 B* x
但是我说的低是跌到50%以下了，好奇怪的说，传代间隔我到还真没关注，谢谢交流。。。
2 A1 j0 l5 G: f( I" r( M9 p; h! i“您”是尊称，不表示年龄哈3 |9 ^5 v7 k6 G7 X& L

wzs1985

你是用什么培养方法？以及用什么冻存试剂？4 \: D5 D% a3 @/ v* K6 B6 b( x, l

花饶然

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0 r( O" T7 g1 K/ `9 j. Z
! N% M4 H, k: [( V! @8 i- v# @冻存液就是完全培养基和10%DMSO，几年来都这样

Ivan0108

10%，是不是抗体孵育出现过程中有问题？一般都不会出现这样的啊

花饶然

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+ Z" c7 j+ h7 l  R! C2 A木有什么问题呢，我流式虽然做的不多，但这几年都会做一些，应该是木有特殊的1 k- o3 b/ |. s2 F* F* T4 `

wzs1985

回复 花饶然 的帖子4 D  Q8 w6 d4 Z6 d' `* b
' L0 D* O4 ], l, A/ r8 Q7 Z4 h
有没有考虑过，现在的血清质量下降了？   你用90%血清加10%DMSO试一试？