咨询一个事，最近开始培养胚胎干细胞，feeder上，怎么复苏都不长不好。

zhang4083

各位大神，; P% O* `  W6 o6 t  Q
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最近开始做胚胎干细胞培养，种植到feeder或者geletin上，可是怎么都长不好，小弟刚到国外，师姐是个外国美女) D1 Z4 E* G$ q9 Y9 S, ^

( H" ]3 P( i/ V2 y( R( l5 V) y我认为有两点不对，大家帮我分析分析，! D# G' q- N9 {- e+ Q8 k% I( o

2 F; V, f$ q4 r3 c$ F8 _) G1 Q) j第一：师姐说，Lif这个东西，不能放到37度上，也就是说含有lif培养液不能放到37摄氏度预热，直接从4度拿出来，加到干细胞上，所以我认为这点对细胞不好，大家认为呢？% V* a# X  x7 n7 y! t

: r- ~9 k7 {4 r, \1 o  N9 N第二：师姐复苏细胞的时候，细胞都是在液氮中（﹣3层），然后取出来，直接拿到2层，来来回回，得5分钟，可是我们在国内复苏细胞，都是从液氮中，拿出来放到小液氮罐子中或者
- K' e& o9 p! @4 P1 }+ i        直接开始溶了，非常迅速，现在我感觉有点慢。, Q8 K. A& I; g3 L1 Y; B; c& T7 q

, U& k, Y/ t( S所以请大家帮我分析分析，我感觉我师姐他们平时就这么做的。所以她还相当自信。因为一直她带着我。

zxc221712

你说的两点都不是问题。

一颗酸柠檬

我培养的是小鼠的胚胎干细胞，复苏的时候就是一下子拿出来直接在水浴锅里晃的，LIF是加在培养基大瓶里，然后分装50ml出来用，加到培养瓶之前也是37℃水浴过的。 我的刚复苏的时候长的不太好，但是传代几次后疯长，简直了。。铺滋养层的速度都跟不上