咨询一个事，最近开始培养胚胎干细胞，feeder上，怎么复苏都不长不好。

zhang4083

各位大神，4 i3 k9 v5 V7 p" l% C
' |5 k& ^+ V: x" t/ _
最近开始做胚胎干细胞培养，种植到feeder或者geletin上，可是怎么都长不好，小弟刚到国外，师姐是个外国美女3 H- d) W' D  d! P
$ G% i# t+ Z1 Q
我认为有两点不对，大家帮我分析分析，
5 u' O! @8 Y8 A) D; {
3 P3 X. \, [1 ]+ K% `3 x  y6 z4 z第一：师姐说，Lif这个东西，不能放到37度上，也就是说含有lif培养液不能放到37摄氏度预热，直接从4度拿出来，加到干细胞上，所以我认为这点对细胞不好，大家认为呢？
; C) u, p; z2 B. S3 N1 A
* H# [' x9 g# V0 l) A+ t. o第二：师姐复苏细胞的时候，细胞都是在液氮中（﹣3层），然后取出来，直接拿到2层，来来回回，得5分钟，可是我们在国内复苏细胞，都是从液氮中，拿出来放到小液氮罐子中或者
6 A2 o6 C, p3 p3 k6 @) Q        直接开始溶了，非常迅速，现在我感觉有点慢。, m) H$ T4 B( p( d& {; a8 `9 R

3 w  u" T: u( G: [6 x所以请大家帮我分析分析，我感觉我师姐他们平时就这么做的。所以她还相当自信。因为一直她带着我。

zxc221712

你说的两点都不是问题。

一颗酸柠檬

我培养的是小鼠的胚胎干细胞，复苏的时候就是一下子拿出来直接在水浴锅里晃的，LIF是加在培养基大瓶里，然后分装50ml出来用，加到培养瓶之前也是37℃水浴过的。 我的刚复苏的时候长的不太好，但是传代几次后疯长，简直了。。铺滋养层的速度都跟不上