体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！
/ G8 y+ Z: Q2 }5 w1 ^! u1 ?我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的- N% g9 b; l2 X' b" Y
一直也没问题的
1 \1 f2 T# R* S1 R: ?5 U! v不知道你的怎么就效果不好/ C, L) ]5 \, i! I/ q7 P( Q
考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

回复 帕帕拉 的帖子7 n; T& H! k' `9 r
( M( v+ g+ o) s$ o
小鼠的谢谢支持

huozhicb

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+ V) s4 J# e9 z: }& e" d- ~, a0 s% x5 P8 T
谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。+ ~8 k5 T$ t3 k' f9 _; p8 e
我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
+ ^- E$ w' m/ |: Z: B: p我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
; m4 h3 p5 G/ j

jhu132llh

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. V2 p! L0 b+ |& T. V8 K, Z" s0 }9 W8 u' g1 }; @1 p
先充气平衡然后测pH是要更加准确2 `. \2 r& M* q5 @" V
但是一般情况下我们也不这样做
! n/ x& R0 O  _8 X太麻烦了0 i+ h/ d: x8 d' J% ~$ M
都是直接用pH计调的pH$ Y4 Q3 r+ ]' D) E5 o
是的
5 A; D4 _; C1 U2 ^  g; A- C加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
; }0 \3 q/ `( B但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
" _- p3 _! O: x) h3 ]5 K不影响细胞的正常生长的
( M2 x1 K: L; L1 s' a+ y) o只是颜色是确实有点欺骗性( F% V7 z2 T# g8 [: I2 g* y
需要及时换液

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子- q' Y+ o! [" d3 E2 n
+ n+ K/ n& s8 i( v5 B1 Y
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！" E9 H3 V$ n$ D/ V. W

: n7 G9 \& B4 j: z- @: w之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
7 E$ s# X1 w" R0 g' L7 v' {9 I: @$ L; o
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子/ i$ I9 t" M# |) ~

" O4 l: G. X) Q. o: e/ e谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！9 k1 t& W* ]6 `  `" G
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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7 r& [6 Q' `; \; k5 X我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
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麻烦版主大哥了，谢谢！