体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！
! |, D$ s1 Y7 A0 }/ F% L: w' _. z我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的% u0 _: r' O4 B+ d; c5 o
一直也没问题的
" [5 \* y: b9 g5 O0 o6 k+ P# T不知道你的怎么就效果不好
  k& Q# R! d* S% k( m4 q) v考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

回复 帕帕拉 的帖子2 D" W! g9 c9 S' S' v  u
3 W" n/ l& F, Q2 x+ J( W& b
小鼠的谢谢支持

huozhicb

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* X9 a& E& k' ^& |* a- S% E* A( f$ r! T' s- l
谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
) i! b; _) Y2 r  a* }4 n我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？7 ^4 C" q) Z& ]8 @1 ?: Y
我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。, {* B/ j' c- `/ X

jhu132llh

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* R! `1 p! h/ F  [8 b  j2 t
6 Q" T4 o  x3 z' ^- [先充气平衡然后测pH是要更加准确) U3 d; o! q: J5 \2 D) D7 P2 q
但是一般情况下我们也不这样做
+ J/ V$ o) j! D5 t: Y% ~太麻烦了
# p, T/ L5 w) a都是直接用pH计调的pH! B$ @% p9 o, p. Q0 t
是的0 Q: C: L8 R$ P8 w1 K3 J* M
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
1 E) o/ c3 P, I8 b0 U. h, h; ~但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的+ j- \- j8 n2 W5 g7 J  Q& E
不影响细胞的正常生长的
, Y" n4 n% k9 Q) h' z只是颜色是确实有点欺骗性1 i$ i7 e# Q$ Q8 `5 z/ g
需要及时换液

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子: [1 P+ W. c% a4 i
& N. _0 b8 n6 E$ m& g' Y- Q
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！2 y! m2 a: k" b# H

  p& J* F/ `6 o5 F% G之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？% k" Q# y  E+ L; T1 d

( f1 W+ F+ H& c我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
1 |' I. Y: G: N- v0 j" k* s3 I3 H4 S( R6 r1 }
麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子) o3 M& o! L7 P3 o  R. E- c

  G2 ^* x' S, u6 n% z谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！9 E) f$ R- ^/ b/ ]5 z% z% q
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
+ N3 Q( R) j# a: s" y: c4 w" g( t) V0 g  E+ |6 c
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？. ^4 b4 d6 @2 q: w% W

$ G1 s- {9 T. w' @4 b# \3 h麻烦版主大哥了，谢谢！