体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！6 o2 Z/ y( l5 S% i+ m2 R# Y
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的, j0 k3 B8 R& f! e1 n2 m- f, S
一直也没问题的
( G1 |2 X  q1 [! G不知道你的怎么就效果不好
0 ^9 i, C& T: ^: [( P- u; S考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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2 I! e' t4 L5 G/ r( l- n/ I4 D  L8 {4 I" [8 n2 Y' |2 ~
小鼠的谢谢支持

huozhicb

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% \9 K1 t2 q0 s4 u- e% \  z. A& D
& F) A/ |5 m+ a% p) p; H4 p5 x谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。: z0 ?- }( P6 v4 g% e% q( V; J. c
我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
3 {  `& `  X& l3 W) \0 s' X; w我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。9 L' O" D' Y1 |

jhu132llh

回复 huozhicb 的帖子, ~7 {4 E3 ]4 n( v: |& r, _. M( T' `

; }4 R" l' U5 t6 w) h先充气平衡然后测pH是要更加准确! c8 m$ a5 {' U3 o" h
但是一般情况下我们也不这样做! t( c; {* t+ F+ t1 Q
太麻烦了
7 F8 Y0 ^, J- X2 M# v! _都是直接用pH计调的pH
7 E1 S8 h) @, k1 r: @! w是的" g* [* b& H3 ^( H, V
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
  h- V) Y) ^: s- J但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
6 g5 A7 S' s8 J5 t不影响细胞的正常生长的
% v3 p# J  |8 e* E, u) ]只是颜色是确实有点欺骗性
  E/ B4 q; j6 G1 l) a9 h需要及时换液

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子+ r/ H/ @1 e5 u1 {$ T7 [6 R( ?
0 {8 D$ e' x; |1 A& b( z
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
) q% x4 \6 c" h5 K) w, k& Z' A2 ^% ^
之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？- f; t7 ]$ \7 H" p! ?  }
( l, K1 G' W3 v' H
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？. v$ a( e. L) u

2 @3 J4 _  b  F: v$ R麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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  X; H" G) n! \# ?3 t8 f! R  t) W$ {* [3 k5 O/ M8 O
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
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% b% y7 j; `5 _6 c. ^之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？- |5 ~9 g0 }9 @2 X; n: D: U" }

# {% ~$ S1 I& J) j- _麻烦版主大哥了，谢谢！