体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！% [! d& W% b& M4 n# H7 G: q
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的
& X# i, k5 ], @2 c" D) b# i. W* `一直也没问题的% K1 J% }% e; g2 K7 o
不知道你的怎么就效果不好7 [2 ^! @1 i9 U3 M  ]; M
考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

回复 帕帕拉 的帖子: k% l! K/ }: D
( y" s  A: F9 T2 U1 _
小鼠的谢谢支持

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子  B& a; E  r6 c1 E( e. M

9 A1 P6 {- P) [' J& v, e谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
/ r/ M0 u! u5 ]我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
' f$ g4 Z( j. U; U0 N1 U! d我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
1 |) S# s0 |% R- G+ K/ _  L* p0 q

jhu132llh

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- M! K2 }& f$ w- |! N/ g  n* _4 a  ]/ D
先充气平衡然后测pH是要更加准确
, n6 I7 @8 y9 Y' |' Q' S6 r) l5 l但是一般情况下我们也不这样做
0 Q( v' X' w2 ?; c太麻烦了
" P  G$ D1 B4 n) I都是直接用pH计调的pH
* D6 ^9 H- [6 X( Q; l& A是的
9 a* B& c! B6 N' Y3 v加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
6 P# v, @' l- u- a6 {% R+ E但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的" d0 o7 t+ N1 s$ a6 }/ x- M
不影响细胞的正常生长的
3 u0 g/ L& Z; R- v只是颜色是确实有点欺骗性/ d% d" O/ r7 t" A" o0 _) v) w
需要及时换液

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子4 S1 p( P& O! H) t* g2 G8 V9 ~$ I

# T) |5 l1 a% R8 i谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！8 H4 ^7 f; s: I9 Z: g: g! m( a

% n% q, `2 [+ _) I; K$ E: w之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？! {6 i4 }5 @; Z" t, @6 d% G
$ M. t% i/ S/ }
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
, @5 l. M6 c# w1 d( ?4 ~0 c
8 _% W; w* u! e, ~麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！! M- X  s* ]3 O) F1 N4 C/ {
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之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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1 I; t- |& F9 c! U9 c( k我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？9 C' M% {( u& R; x

% I: X6 @. W/ m! ^9 O麻烦版主大哥了，谢谢！