干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 体外受精培养液的pH各是多少！ [打印本页]
作者: huozhicb    时间: 2011-8-29 15:12     标题: 体外受精培养液的pH各是多少！

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！! r- v0 s- M7 J" L
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。
作者: 帕帕拉    时间: 2011-8-29 17:21

你做的什么动物？
作者: 帕帕拉    时间: 2011-8-29 17:21

你做的什么动物？
作者: jhu132llh    时间: 2011-8-29 18:30

都是7.4的
) {5 ?! i) y) k. I8 C一直也没问题的
7 K" W# K' k7 L0 ^' Y1 Z5 v) k不知道你的怎么就效果不好- W/ b8 h  J; U( B$ |
考虑过培养箱的培养条件吗
作者: POPOLD    时间: 2011-8-30 11:30

7.2
作者: huozhicb    时间: 2011-9-2 22:15

回复 帕帕拉 的帖子
7 @1 _! f% Q6 X! k  H7 r4 F, @' J7 Q2 A/ W3 V- \- g
小鼠的谢谢支持
作者: huozhicb    时间: 2011-9-2 22:41

回复 jhu132llh 的帖子& }* |- r) R: Z0 w- ?8 Q

8 @- {/ w& ?( E3 l- O' E谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。0 L1 X8 E  n  X
我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
9 R& {6 |- e& [; p, s. \我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。9 J3 a- `- h# q2 o) J* y( v8 A
作者: jhu132llh    时间: 2011-9-4 09:07

回复 huozhicb 的帖子
' Q: ~0 _4 V0 g, k6 W% ^. i: A0 v1 L" h  ?: B
先充气平衡然后测pH是要更加准确; `1 A; u5 A% H% b5 q! _2 K4 M8 C, u
但是一般情况下我们也不这样做/ g0 S9 u4 W& L2 w
太麻烦了
7 S1 D# R% ~" w5 Z/ e( _! a7 ^都是直接用pH计调的pH
2 o- o9 m. |, I是的
4 L/ Z6 l5 D9 J  T加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的
7 e) Z3 \+ Q( g# S但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的/ x: u2 R2 p( s9 e+ P
不影响细胞的正常生长的
6 @3 M! I/ D; J+ m) c只是颜色是确实有点欺骗性
- O# K: m' X* \1 e+ }6 U0 x需要及时换液
作者: huozhicb    时间: 2011-9-5 09:29

回复 jhu132llh 的帖子' l- P8 e; C  u- }

! y2 O- t' ~; S& y谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
* z) y: A: U- N; r" t
2 ^6 ~9 Q  f' t之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？' b9 K% h) J6 z3 C! j3 r
( N( V8 Q4 \( E. c
我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
/ E5 p6 C+ J+ L% |: k, I0 z
! f; P- [6 R: a' f6 F* n. _麻烦版主大哥了，谢谢！
作者: huozhicb    时间: 2011-9-5 09:29

回复 jhu132llh 的帖子) x! E$ U* j9 x- @- S
4 ~' S( \# z( O0 v$ O  {4 B5 c
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！+ y/ [6 M' _4 F
9 }% ^! A+ D3 R7 \9 c; [- E  J. K
之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
. J# G9 N. H. A- `" i9 Y, F
& {$ j4 h# S* o6 [9 d! w我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
( t  e; u8 Y" J6 o+ R; D' \  y$ e7 H' c; N5 c& z
麻烦版主大哥了，谢谢！
作者: jhu132llh    时间: 2011-9-5 17:32

培养箱的条件看起来是没问题的了8 _0 C! W& {! n4 u" D  B9 r
看情况是精子活性不够引起有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少$ r+ M' e+ p- O6 V$ H
看来可能是采精后精子保存稀释以及获能步骤中可能有问题了
# {( Q' a$ Z# {2 V1 Z$ b6 ^) r你的新鲜精液的精子活力有多少那？
作者: POPOLD    时间: 2011-9-5 22:22

加些hepes



欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5