关于人骨髓间充质干细胞培养方法

sunjianhua2000

最近想做人骨髓间充质干细胞，上网查文献之后发现有很多方法。我目前想用密度梯度离心法分离BMSC，具体分离液是FYCOLL和PERCOLL，想请有经验的战友推荐下哪个分离液好，并烦请写一下具体的操作程序。谢谢！！！

人在日本

用什么梯度分离啊，直接打到七号钟头里过一遍就行了，又快又省事

wangweilie0418

观察骨髓血有无凝血1 {+ p: ]2 ^& f! m' R- u
↓4 e+ S7 S4 a4 N! A: O8 d
PBS补加至毎管45ml（毎管血量尽量均匀），1800转∕分钟，10分钟。7 B5 Q" ]! J( F( _" H
↓$ L+ @& ^$ x, u, Z0 {, f. d
弃上清，将沉淀用PBS重悬，毎管补加PBS后共30ml。
: e& `! p  W, m/ a4 o2 R8 _9 J) {取已分装好的Ficoll（15ml∕管）将上述重悬液缓缓加于Ficoll上
- o! l! c  p- e2 d2 x' e2500转∕分钟，20分钟5 z1 Q3 ]. H% e0 D8 U8 r
↓
7 e& Q! D0 _* _% V& A1 U1 i吸取白膜层，补加PBS至45ml，1500转∕分钟，8分钟。) a$ k+ |) a4 W" M
↓
# r% g7 ?  O# w取沉淀，加PBS至45ml，1200转∕分钟，3分钟。/ H9 j+ f- }$ g( L5 N$ k
↓& v: N" v/ l& _
重悬，培养。
% ?8 D3 ?: Y8 Q: Q6 w5 K1 m5 y

sunjianhua2000

pbs与骨髓稀释比例是多少，骨髓稀释液与FICOLL的比例是多少？

琛儿326

回复 sunjianhua2000 的帖子' A5 O" _( V4 ^7 z$ g: j" ]
+ f( h+ O; y: {+ u' g
我们实验室用以下比例
! e" Q/ ?. ]/ b+ I' X5 n7 gpbs：骨髓液=1:3，
: X1 h# d; q" l( |0 Z; Q骨髓稀释液：FICOLL=2:1
6 _5 I6 I# I" x3 r- V, C

wangweilie0418

pbs：骨髓液=1:2        骨髓稀释液：FICOLL=3:1$ k7 _$ ^) Z; h2 t9 r) Q% p( i9 l. a

wangweilie0418

不好意思，骨髓稀释液：FICOLL=2:18 b, N) A& J+ {1 u- O6 m

wcforever126

回复 wangweilie0418 的帖子2 n) _: `# X  b* X; E0 G: Q

+ P5 v, A: X6 B; a  S请问您用的FICOLL多少密度的
6 @/ ^  E1 X* S1 R) m