关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。' \6 r' S4 N9 q8 o# s7 B; f7 S& |

huangcong1988

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* n7 R5 V/ \9 |' C7 J; u. B# A5 i$ d  c* E! j; J
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

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* r( ^" ]' T, X* O) `9 q: y+ N* u; s/ [: V: p
是，PEG也用于细胞融合

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子1 ~5 U& x" W3 Q3 d3 ^- P
2 r$ d* v, H. K* ^- \
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
! X; D) _4 h8 N8 ], \# c# u9 S但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
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3 g3 k& v. o  O! L4 v, @: u) W40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
1 |9 B& |/ }! y- L, i# X/ \: h7 r+ E8 D2 y% E" q

( ^& c1 D7 B0 B假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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0 s, T& F0 ~1 u0 z4 O) O& `' s' k
- v1 J  i9 |) F$ j3 G  O& `不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

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" g3 O1 Z6 l4 l8 i4 t4 p0 S% h, Q4 d
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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8 ~, e5 V: C4 k. H" ^( J& {: _
5 j7 |1 y4 b% U+ Y0 E: o# z. V5 y你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?1 ]0 \+ Y) S4 h% [* A
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？! b. ?6 ^& x- g  g$ n# ?/ s* c

$ Q7 h3 d7 E- _' p8 Y, g, Z$ Y& a若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：! y! N2 D. c8 Y8 T
! P/ h: u- ]) D+ y  H
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。8 @! @* e0 g- k7 U6 i

& i( u- M3 x( \, s$ L6 U" o补充内容 (2011-11-1 19:54):/ Q9 j/ k: V! m. N' H4 L( R
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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  Q2 c& F6 G5 S1 x. f& Z7 l; T. C# |! T0 y. I1 i3 i) m& L0 T% p4 L4 n) r
非常感谢！我是为了浓缩慢病毒