关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。
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huangcong1988

回复 john7812x 的帖子& J: b8 j6 W  Q5 r- V# p% \

% y1 v  J# V. ?% \: h+ ^哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子/ Q+ K: l) `( r  u

% G3 ]6 U  \1 K是，PEG也用于细胞融合

john7812x

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# N+ V7 \! w) u3 y# ^( E9 UPEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
2 r- q" {' n# A6 K; W( k但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
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40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
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2 [" z7 r8 D1 i. n/ d. r
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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  W6 S& W  |- r) p3 [, }' s
  ^7 j7 v7 Y4 i1 q不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子1 c" G, |0 ?- p( S$ }# H# P

$ u6 S- X# X4 T2 l  l有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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- _8 w/ s' [! _+ o你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?; o0 p2 X; I6 {" p4 y! Z4 g
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？
2 P0 \/ x- I. i5 G. X! k" X& b) a7 V9 y+ U  @0 c% F: [
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
" ]; P; x- F( |% x0 F, m
0 p1 j3 b' F4 R" I若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。! Q' U) ]5 A6 L% ~

+ N( ?6 I8 {8 {& ~7 e* X补充内容 (2011-11-1 19:54):
9 u" q8 L' _* M  C: ^" e在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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非常感谢！我是为了浓缩慢病毒