最近在养人的真皮成纤维细胞,但是整个过程未见单个细胞,请各位战友帮我分析一下原因

bin

回复 chongziqiong 的帖子
1 x& g/ K8 p6 v& z
8 E$ F1 g" T! z, \4 W* i$ e* ]你这是什么组织呀，几天以后的，用什么培养基？( u! N9 {- I/ }5 p) v* x; e+ k5 S6 q) z

youzi821

细胞冻存在液氮是要加DMSO或甘油的，你这个直接把组织细胞放到液氮，你还想养出细胞来，肯定不行啊！！

yooicelili

用胶原酶消化真皮组织，会得到大量的真皮成纤维细胞，第二天就可以收到很多细胞。

xyybetter

回复 chongziqiong 的帖子
. \. e8 o  X8 z3 X' E3 f. z8 Z
, O1 {  }$ I6 }: f. p请问碘酒，酒精，双抗分别泡多久？消化皮肤时用的是那种酶？谢谢

receiver1

你没有得到细胞的原因，是因为你把材料放到液氮里了。没有经过标准化的冻存程序，细胞很难存活，即使是在组织中。另外，你消化了17小时，感觉也挺长的。我们一般头天下午或晚上消化上，第二天上午就处理了。下次你用新鲜的皮肤材料吧。

金刚石（书记）

标本放液氮细胞肯定都死了，取回标本若不能及时做，可加培养基放于4度冰箱，但一定要尽快做，放几个小时还是可以的。6 D( P- _' u+ t8 S: H
然后标本剪除皮下脂肪组织等后剪成小块放中性蛋白酶4度过夜，分离表真皮，真皮侧剪碎后再用胰酶37度消化5-10分钟，含血清培养基终止消化后过滤网，将滤液离心后接种即可。当然分离表真皮后也可直接将真皮侧放入培养瓶培养组织块几天即有细胞爬出。祝成功。

金刚石（书记）

标本放液氮细胞肯定都死了，取回标本若不能及时做，可加培养基放于4度冰箱，但一定要尽快做，放几个小时还是可以的。
8 N" l6 Z- m3 A; _( H然后标本剪除皮下脂肪组织等后剪成小块放中性蛋白酶4度过夜，分离表真皮，真皮侧剪碎后再用胰酶37度消化5-10分钟，含血清培养基终止消化后过滤网，将滤液离心后接种即可。当然分离表真皮后也可直接将真皮侧放入培养瓶培养组织块几天即有细胞爬出。祝成功。

sadieshen

肯定不能放液氮阿，直接都死了。。。我是分了表皮和真皮后，把真皮剪碎，胶原酶消化至没有肉眼可见小块，离心，洗涤，加培液直接铺板，第3天就很满了。

chongziqiong

回复 bin 的帖子; K5 {  N4 L; N
- Q+ |! J, E0 r% K" P, y
人的真皮，7天左右，普通的高糖DMEM+FBS

chongziqiong

回复 xyybetter 的帖子
5 s8 A0 j0 }: s9 T
) y! {8 b" C, _碘酒1-2min，酒精是脱碘的时间不用很长，双抗PBS可以多洗
4 Y0 E$ Q0 O# j/ ~消化皮肤？你问的是皮肤层消化开还是表皮还是真皮？