最近在养人的真皮成纤维细胞,但是整个过程未见单个细胞,请各位战友帮我分析一下原因 - 皮肤干细胞专区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

12 3 下一页

返回列表

查看: 120811\|回复: 22	go 最近在养人的真皮成纤维细胞,但是整个过程未见单个细胞,请各位战友帮我分析一下原因 [复制链接]

ujj_hong

新手上路

Rank: 1

积分: 5
威望: 5
包包: 11

楼主

发表于 2012-3-13 15:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我最近在养人的真皮成纤维细胞,但是整个过程未见单个细胞,请各位战友帮我分析一下原因.我的具体方法是:
(1)将皮肤置于75%的酒精中消毒1min;
(2)将皮肤置于双抗中浸泡30min;2 ]- B* l" H) Z0 u% G. A
(3)配置浓度为0.2%的DispaseⅡ酶,将皮肤剪成2×5mm的条状,放入酶中,4度作用17小时;
(4)将真皮和表皮用镊子分离;$ b6 k* J7 e! a, j+ {' i. M- X
(5)将真皮组织用眼科剪刀剪碎,平铺在培养瓶中,倒置,加入3mL培养基(DMEM培养基+15%胎牛血清),3小时后,轻轻翻转培养瓶培养;培养了5天后仍未见有细胞爬出. 显微镜下观察只是看到很多线团,像头发一样粗细,没有单个的细胞.7 f. k; N% E" {0 ]; ~: ^5 E9 U: r2 i0 K/ \
(6)另外我还做了一组对照,将真皮组织用胶原酶消化,动态观察消化的整个过程,但奇怪的是,整个过程中没有观察到单个细胞3 }) w' ?+ u: B% j) E4 |. C; E+ P- h
请各位战友帮我分析一下这是什么情况,为什么整个过程都没有单个细胞出现呢?谢谢!

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

Rank: 1

积分: 5
威望: 5
包包: 11

沙发

发表于 2012-3-13 15:09 |只看该作者

另外想请问一下,标本拿回来后因为不能及时进行实验,所以将标本直接放到液氮中去了,不知道这样是否也会影响细胞的活力?

回复引用

举报返回顶部

chongziqiong

新手上路

Rank: 1

积分: 27
威望: 27
包包: 219

藤椅

发表于 2012-3-14 10:35 |只看该作者

取来的新鲜标本最好马上就做，年轻的可以在培养基里4°放置一天，年龄偏大的最好当天就做。我一般取来标本后碘酒、酒精、加双抗的PBS依次浸泡后，要用手术刀把多余的脂肪层刮掉（越干净越好），4°消化过夜，后分离表皮层和真皮层。然后把真皮切成2mm左右的小方块，然后真皮层朝下，贴到培养皿里。加入培养液，培养就好了，一般3-4d就会有细胞爬出啦。