为什么神经球吹打传代后，状态很差

jessewill

原代培养的神经球吹打50次之后，在显微镜下看球基本上被吹打成单细胞，48H之后产生一些细胞球，但是感觉球的状态非常差) T; F( V0 k# I- l$ ?2 W
- d( d& m* u4 X
1.球周围不圆润
; [1 O+ ?  K% c2.球的立体感不强，像很多细胞粘在一起，没有神经球的立体感
/ M7 i2 x9 D( l% ]4 j& h8 c' y# B
为什么会这样？我才传第二代啊，求解释

细胞海洋

建议上图

zpzp0312

聚集生长的细胞都会有这样的问题0 ?: _) z" X2 L) l
建议用机械法传代9 B. ?  [* n& x8 ?! {% E' K( Z
或者使用胶原酶多作用一段时间
- x4 y, X  G# w% W! k% Z0 w胶原酶比较温和

jojomayer

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8 ~6 g+ a! ]* g& B; a& z- w% Z. ~- X* O
请问您说的胶原酶是Accutase？

zpzp0312

回复 jojomayer 的帖子1 G" y3 x; O& o4 l

3 f  i9 ?8 j& u3 ?! f% S7 A( R是传统的胶原酶% C  H3 m" M7 c& _
accutase也是可以的，但作用似乎差一些，如果可以在消化后使用机械力choping也是可以的。* ?6 l. U1 p# P
通常来说accutase主要是作用于活力差的细胞类型。如果是单层生长的细胞效果比较明显. \( e  P$ I  H
你可以先用传统的胶原酶

ss安雅熙

我 的神经球 机械吹打根本不能成单细胞 我的原代培养密度10的6次方，4~5天就能传代 球很多 制备单细胞比较困难  但是消化成晓得团块即可 这样长起来的时间就会比较快 单细胞可能长的慢些

招财鼠

回复 ss安雅熙 的帖子9 N$ t& ~) i0 Q$ @; q1 t+ ~7 ]3 |

- h' E  d0 R, N# A9 F5 I+ i神经球打散传代以后可以成功进行贴壁培养吗。。。。？？？

xiangxiaoliang

神经球用Accutase 37度消化5min后，800rpm，3min 离心去掉accutase；再用加200ul完全培养基，用200ul枪头吹打20次；最后加800ul培养基，计数。一般48h后形成的球是跟你描述的差不多，五天左右球的形态就很正常了。